電針并BMSCs移植對大鼠脊髓損傷組織NGFmRNA表達的影響.pdf

1、目的：本研究的目的是探索電針促進骨髓基質(zhì)細胞(bone marrowstromal cells，BMSCs)分化為神經(jīng)細胞的可行性；通過觀察電針聯(lián)合BMSCs移植對大鼠急性脊髓損傷神經(jīng)功能恢復(fù)的影響，探討其作用的可能機制。 方法： 1．實驗動物及分組SD健康幼鼠8只，體重約100g左右，雌雄不限，用來進行BMSCs原代培養(yǎng)。 SD健康成年大鼠72只，體重250～350g，雌雄不限，隨機分為四組： (1)P

2、BS組：18只，脊髓ALLEN’S打擊傷后在損傷臨近區(qū)注射PBS； (2)BMSC組：18只，脊髓ALLEN’S打擊傷后在損傷臨近區(qū)注射5一溴脫氧核苷尿嘧啶(BrdU)標記的BMSCs； (3)電針組：18只，脊髓ALLEN’S打擊傷后24h進行電針治療； (4)電針BMSC組(電針與BMSC移植聯(lián)合應(yīng)用)：18只，受損脊髓移植BrdU標記過的BMSCs后24h進行電針治療。 以上各組分為3d、7d、14

3、d三個時相點。 2．指標檢測 (1)體外分離培養(yǎng) BMSCs，鏡下進行細胞形態(tài)學觀察； (2)移植后3天、7天、14天，應(yīng)用CBS評分法評價治療前后損傷大鼠神經(jīng)功能改善狀況。 (3)移植后3天、7天、14天，應(yīng)用原位雜交方法檢測損傷大鼠脊髓NGFmRNA表達變化情況。 (4)于移植后第14天應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測 BrdU 標記的BMSCs的神經(jīng)元烯醇化酶(NSE)表達情況。 結(jié)果：

4、 1．BMSCs的原代和傳代培養(yǎng)：原代細胞呈集落趨勢貼壁生長，分布不均勻。接種10天左右，細胞融合達90％以上，此時進行傳代培養(yǎng)。傳代后細胞增殖迅速，7天左右細胞即融合。傳代后的細胞生長均勻，大部分呈長梭形。 2．各時相點的各組動物神經(jīng)功能均有不同程度的恢復(fù)。BMSC組、電針組與PBS組比較神經(jīng)功能評分有顯著性差異(P<0.05)；電針BMSC組與PBS組比較有非常顯著性差異(P<0.01)；而電針BMSC組與單純BMSC組和單

5、純電針組比較，神經(jīng)功能恢復(fù)的更好，評分亦有顯著性差異(P<0.05)；而BMSC組和電針組比較無顯著性差異(P>0.05)。 3．BMSC組與電針組損傷脊髓NGFmRNA表達較PBS組有明顯增加(P<0.05)；電針BMSC組較PBS組表達增加更為明顯(P<0.01)；電針：BMSC組與單純BMSC組和單純電針組比較NGFmRNA的表達亦有明顯增加(P<0.05)；電針組與BMSC組比較無顯著性差異(P>0.05)。 4