電針聯(lián)合BMSCs移植治療對腦出血大鼠腦組織內(nèi)Glu及其受體GluR2、NMDAR2A表達(dá)的影響.pdf

1、目的:觀察腦出血(intracerebral hemorrhage，ICH)大鼠在電針(electro-acupuncture，Ea)聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymalstem cells，BMSCs)移植治療下，血清中髓磷脂堿性蛋白(myelin basicprotein，MBP)的含量和血腫周邊腦組織興奮性神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸(glutamate，Glu)及其受體N-甲基-D-天門冬氨酸受體-2A(N-m

2、ethyl-D-aspartatereceptor-2A，NMDAR2A)、谷氨酸受體-2（glutamate receptor-2，GluR2）的表達(dá)，探討聯(lián)合治療方案的可能機(jī)制。
　　方法:(1)培養(yǎng)BMSCs:將凍存的BMSCs通過常規(guī)復(fù)蘇、傳代及誘導(dǎo)后，調(diào)整細(xì)胞濃度至2.5×107個(gè)/mL待移植使用。(2)構(gòu)建ICH大鼠模型:選用SD大鼠，向其右側(cè)尾殼核注射膠原酶和肝素以構(gòu)建ICH模型。術(shù)后分3次（2h、24h、48h時(shí)）

3、行神經(jīng)損害程度評分(neurological severity score，NSS評分)，任意1次得分在9分以上者視為造模成功。(3)動(dòng)物分組:將造模成功的大鼠隨機(jī)分成BMSCs移植組(BMSCs組)、生理鹽水組(NS組)、電針聯(lián)合BMSCs細(xì)胞移植組（Ea-BMSCs組）、電針治療組（Ea組）4組，于造模成功后第3d分別采用注入20μl BMSCs、20μl生理鹽水、20μl BMSCs并輔以電針刺激（百會穴和大椎穴）及單純電針刺激予

4、以治療。各組繼分為治療后1d、3d、5d、7d和14d共5個(gè)亞組，于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)對大鼠NSS評分后再采血收集血清，處死大鼠取腦備用。(4)酶聯(lián)免疫吸附測定血清中MBP的含量。(5)免疫組織化學(xué)檢測Glu及其受體GluR2、NMDAR2A的表達(dá)。
　　結(jié)果:(1) NSS評分結(jié)果（造模成功第3d，對各組分別實(shí)施干預(yù)后）:Ea-BMSCs組在第3d、5d、7d、14d與同時(shí)間點(diǎn)NS組、Ea組、BMSCs組比較，NSS評分顯著下降(P＜0

5、.05);BMSCs組在第3d、5d、7d、14d與同時(shí)間點(diǎn)NS組比較，NSS評分顯著下降(P＜0.05);Ea組在第3d、5d、7d和14d與同時(shí)間點(diǎn)NS組比較，NSS評分明顯下降(P＜0.05)。(2)出血灶周圍表達(dá)的Glu積分光密度值（integral optical density, IOD）:各組Glu表達(dá)在1d時(shí)均快速上升，3d時(shí)達(dá)峰值，隨后緩慢下降。Ea-BMSCs組Glu的表達(dá)，在各時(shí)間點(diǎn)與同一時(shí)間NS組、Ea組、BMS

6、Cs組比較，明顯下降，差異顯著(P＜0.05）。BMSCs組、Ea組Glu的表達(dá)，在3d、5d、7d時(shí)與同時(shí)間點(diǎn)NS組比較，明顯下降，差異顯著(P＜0.05）。(3)出血灶周圍表達(dá)的NMDAR2A的IOD:各組NMDAR2A表達(dá)均在第1d時(shí)開始升高，第3d時(shí)達(dá)到峰值;然后回落。Ea-BMSCs組NMDAR2A的表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)與同時(shí)間點(diǎn)NS組相比較，表達(dá)下降，差異顯著(P＜0.05）;在第3d、5d、7d與同時(shí)間點(diǎn)Ea組比較，表達(dá)下降，差

7、異顯著(P＜0.05）;在第3d、5d與同時(shí)間點(diǎn)BMSCs組比較，表達(dá)下降，差異顯著(P＜0.05）。BMSCs組NMDAR2A的表達(dá)在第1d、3d、5d、7d時(shí)與同時(shí)間點(diǎn)NS組相比較，表達(dá)下降，差異顯著(P＜0.05);Ea組NMDAR2A的表達(dá)在第3d、5d、7d時(shí)與同時(shí)間點(diǎn)NS組相比較，表達(dá)下降，差異顯著(P＜0.05）。(4)出血灶周圍表達(dá)的GluR2的IOD:各組GluR2表達(dá)在第1d時(shí)輕微升高，呈弱陽性表達(dá)。隨時(shí)間推移,陽性

8、表達(dá)逐漸增強(qiáng)，第7d時(shí)達(dá)最高，以Ea-BMSCs組的升高最為顯著。Ea-BMSCs組GluR2的表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)與同時(shí)間點(diǎn)BMSCs組、Ea組、NS組相比較，均表達(dá)增高，差異顯著（P＜0.05）。BMSCs組、Ea組GluR2的表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)與同時(shí)間點(diǎn)NS組相比較，表達(dá)增高，差異顯著(P＜0.05）。(5)各組血清MBP含量的檢測結(jié)果:BMSCs組MBP表達(dá)第5d、7d、14d高于Ea-BMSCs組(P＜0.05); Ea組第1d、3d時(shí)

9、MBP表達(dá)低于Ea-BMSCs組(P＜0.05)，第14d高于Ea-BMSCs組(P＜0.05)。與NS組比較: Ea-BMSCs組第5d、7d、14d MBP表達(dá)明顯低于NS組(P＜0.01);BMSCs組第14d低于NS組(P＜0.05); Ea組第5d、7d、14d低于NS組(P＜0.05)。
　　結(jié)論:(1)電針聯(lián)合BMSCs移植治療ICH大鼠較單純電針刺激或BMSCs移植更能降低出血灶周邊區(qū)Glu、NMDAR2A的表達(dá)，