電針和BMSCs移植聯(lián)合應(yīng)用對(duì)大鼠腦出血病灶周圍微環(huán)境影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:觀察電針和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植聯(lián)合應(yīng)用對(duì)腦出血(intracerebral hemorrhage,ICH)病灶及周圍微環(huán)境的影響,探討神經(jīng)元修復(fù)的機(jī)制。
　　方法:1.將復(fù)蘇的BMSCs培養(yǎng)貼壁達(dá)80％時(shí),將培養(yǎng)液更換為預(yù)誘導(dǎo)液培養(yǎng)24小時(shí)后,再更換為無血清誘導(dǎo)液誘導(dǎo)6h。收集細(xì)胞備用。2.采用膠原酶及肝素注入尾狀核制備大鼠ICH模型。3.術(shù)

2、后分別在2h、24h、48h時(shí)間點(diǎn)對(duì)SD大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分(Neurological Severity Score,NSS)評(píng)分,評(píng)分大于9分者則納入實(shí)驗(yàn)。并隨機(jī)分為:對(duì)照組(control組)、細(xì)胞移植組(BMSCs組)、電針與細(xì)胞移植聯(lián)合組(electro-acupuncture combined with BMSCs transplantation, Ea BMSCs組)。4.在術(shù)后第3天時(shí)通過腦立體定位儀導(dǎo)航,將20ml0.9

3、％生理鹽(Normal saline,NS)水和BMSCs懸液移植入ICH病灶中。根據(jù)移植后喂養(yǎng)天數(shù)每組再分為:1d、3d、5d、7d、14d五個(gè)亞組。移植2h后,對(duì)EaBMSCs組取大椎穴和百會(huì)穴,進(jìn)行電針治療,每天一次,直至處死。5.對(duì)各組SD大鼠每天行NSS評(píng)分一次,直至處死取材。6.通過蛋白免疫印跡(Wetern Blotting,WB)方法檢測(cè)各組不同時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor,NGF)、腦源性

4、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子( brain derived neurophic factor, BDNF)、β-微管蛋白(tubulin)Ⅲ及甘油醛-3-磷酸脫氫酶( glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase,GAPDH)蛋白表達(dá)變化情況。
　　結(jié)果:1.制備大鼠ICH模型成功后,移植細(xì)胞前對(duì)control組、BMSCs組、Ea BMSCs組進(jìn)行NSS評(píng)分,各組之間評(píng)分無顯著性差異;移植后第5天時(shí),移植后第5

5、天,BMSCs組評(píng)分顯著低于control組(P<0.05);Ea BMSCs組(除1d外)明顯低于control組,(P<0.05)。Ea BMSCs組和control組相比較(除1d外)均有顯著差異,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。改善神經(jīng)功能缺失癥狀更明顯。2.Ea BMSCs組和BMSCs組的NGF蛋白表達(dá)明顯增加;于移植后7天、14天,BMSCs組較control組增加顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Ea BMSCs組與BM

6、SCs組和control組比較(除1d外)增加更明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)(P<0.05)。Ea BMSCs組大鼠ICH病灶周圍 NGF蛋白表達(dá)上調(diào)更明顯。3.Ea BMSCs組和BMSCs組BDNF蛋白表達(dá)明顯增加,移植后5天、7天、14天時(shí),較control組差異顯著有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);在移植后第3天、5天、14天, Ea BMSCs組較BMSCs組表達(dá)增加顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Ea BMSCs組較單純BMSCs組和

7、control組大鼠ICH病灶周圍BDNF蛋白表達(dá)上調(diào)更明顯。4.在同一時(shí)間點(diǎn),Ea BMSCs組和BMSCs組與control組比較β-tubulinⅢ蛋白表達(dá)明顯增加;在移植后5天、7天、14天, BMSCs組較control組增加顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Ea BMSCs組(除移植1天)均較BMSCs組明顯增加,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P<0.05)。電針和BMSCs移植聯(lián)合應(yīng)用較單純BMSCs移植,更利于神經(jīng)元的修復(fù)。