丹參注射液對宮內感染-炎癥致早產仔鼠腦室周圍白質軟化癥SYP、GAP-43表達的影響.pdf

1、　　目的：觀察丹參注射液對宮內感染/炎癥致早產仔鼠腦室周圍白質軟化癥突觸素(SYP)和神經生長相關蛋白(GAP-43)表達的影響,探討活血化瘀藥物改善宮內感染/炎癥致早產腦損傷的機制,提出宮內感染/炎癥致腦白質軟化癥的中醫(yī)藥治療可以從瘀論治的新理論。
　　方法：( 1 )動物模型制備：24 只孕第 16 天的脂多糖(LPS)組大鼠予LPS350μg/kg·d,連續(xù)兩天腹腔注射,6 只孕鼠于孕第 16 天予等劑量生理鹽水腹腔注射

2、,連續(xù)兩天作為對照組。孕21天前分娩的仔鼠為早產仔鼠。記錄兩組孕鼠的分娩時間及出生體重,觀察新生仔鼠的行為活動。仔鼠出生后即刻隨機選 LPS組和對照組孕鼠各 4 只取子宮和胎盤 HE 染色觀察宮內感染情況,判斷標準為大量中性粒細胞浸潤。隨機選 LPS 組和對照組仔鼠各 10 只斷頭取腦 HE 染色,觀察腦室周圍白質損傷情況。(2)隨機選 LPS 組孕鼠早產仔鼠 40 只,隨機分為 4組,每組10只。分別為：丹參注射液高劑量組( A),丹

3、參注射液低劑量組( B),神經節(jié)苷脂組(C),模型組(D)。隨機選對照組孕鼠足月仔鼠 10只,為正常對照組(E)。5組大鼠同等條件下喂養(yǎng)。干預方法：LPS組孕鼠仔鼠每組隨機選取 10只,于生后第 8天給予干預。A組予丹參注射液高劑量 9ml/㎏·d,B組予丹參注射液低劑量4.5ml/㎏·d,C組予單唾液酸四己糖神經節(jié)苷脂鈉注射液6mg/㎏·d,D組予生理鹽水 9ml/㎏·d,E 組予生理鹽水 9ml/㎏·d,均腹腔注射,連續(xù) 7 天。隨

4、后同條件繼續(xù)喂養(yǎng)至 21日齡。(3)21日齡時對5組大鼠進行神經行為學測試(采用懸吊試驗、斜坡試驗、Cylinder試驗),并取腦組織采用免疫組化方法對 SYP、GAP-43進行測定。
　　結果：(1) LPS組24只孕鼠中6只孕鼠分娩前死亡,13只孕鼠娩出早產仔鼠79只,死產仔鼠41只,余5只足月順利生產,娩出足月仔鼠 49只,死產仔鼠5只,剔除足月鼠；對照組6只孕鼠均足月順利生產,孕鼠無提前分娩及死亡,共娩出活產足月仔鼠5

5、7只,無死產仔鼠；與正常對照組仔鼠相比,LPS組仔鼠出生時皮膚顏色紫紺、體重低、活動少；LPS 組子宮及胎盤病理 HE 染色見大量中性粒細胞浸潤,說明模型組孕鼠存在宮內感染；LPS組仔鼠腦組織白質結構稀疏,膠質細胞聚集,可見出血改變。(2) 于21日齡行為學測試,3種方法行為學測試,結果：藥物干預組與模型組相比,藥物干預組仔鼠反應快,四肢活動靈活,懸吊時上肢抓握時間較長,在斜坡停留時間短,后足站立時前足觸壁次數百分比值較高,而模型組仔鼠

6、反應遲鈍,四肢活動不如干預組,懸吊時上肢抓握時間短,在斜坡上停留時間長,后足站立時前足觸壁次數百分比值較低,兩組之間差異有極顯著意義(P<0.01)；藥物干預組與正常對照組相比,正常對照組反應較快,兩組之間差異有極顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)；藥物干預組中丹參高劑量組與神經節(jié)苷脂組相比,兩組仔鼠反應均快,四肢活動靈活,兩組之間差異無顯著統(tǒng)計學意義(P>0.05)；藥物干預組中丹參高劑量組與丹參低劑量組相比,兩組仔鼠均反應快,活動靈活,

7、兩組之間差異無顯著統(tǒng)計學意義(P>0.05)；藥物干預組中神經節(jié)苷脂組與丹參低劑量組相比,兩組仔鼠四肢活動均靈活,兩組之間差異無顯著統(tǒng)計學意義(P>0.05)。(3)丹參注射液干預治療后使宮內感染/炎癥致早產仔鼠腦室周圍白質軟化癥中SYP、GAP-43陽性表達均增加。SYP、GAP-43結果：藥物干預組與模型組相比,藥物干預組對宮內感染/炎癥致早產仔鼠腦室周圍白質軟化中SYP、GAP-43陽性表達較模型組增多,兩組之間差異有極顯著意義(

8、P<0.01)；藥物干預組與正常對照組相比,正常對照組中 SYP、GAP-43 陽性表達較藥物干預組增多,兩組之間差異有極顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)；藥物干預組中丹參高劑量組與神經節(jié)苷脂組相比,兩組仔鼠經藥物干預后腦組織 SYP、GAP-43 均增多,兩組之間差異無顯著統(tǒng)計學意義(P>0.05)；藥物干預組中丹參高劑量組與低劑量組相比,兩組仔鼠 SYP、GAP-43 陽性表達均增多,兩組之間差異無顯著統(tǒng)計學意義(P>0.05)；藥物

9、干預組中神經節(jié)苷脂組與丹參低劑量組相比,兩組仔鼠 SYP、GAP-43陽性表達均增多,兩組之間差異無顯著統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　結論：(1)丹參注射液對宮內感染/炎癥致早產仔鼠腦室周圍白質軟化癥仔鼠行為學方面具有明顯的改善作用。(2)丹參注射液對宮內感染/炎癥致早產仔鼠腦室周圍白質軟化癥的作用機制,可能與上調SYP、GAP-43的表達有關。(3)宮內感染/炎癥致早產仔鼠腦室周圍白質軟化癥的中醫(yī)病理機制主要是―血瘀‖的