針刺對腦缺血大鼠神經(jīng)功能及健側(cè)皮質(zhì)運(yùn)動(dòng)區(qū)GAP-43表達(dá)水平的影響.pdf

1、目的：探討針刺對腦缺血大鼠健側(cè)皮質(zhì)運(yùn)動(dòng)區(qū)GAP-43表達(dá)水平的影響，及其與大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)的關(guān)系。
　　方法：選用 SPF級雄性大鼠100只，將100只大鼠隨機(jī)分成：假手術(shù)組20只，造模組80只。對造模組80只大鼠進(jìn)行線栓法造模，造模成功后，隨機(jī)分為模型組20只，針刺組60只，針刺組隨機(jī)分為患側(cè)針刺組20只，健側(cè)針刺組20只，雙側(cè)針刺組20只。假手術(shù)組和模型組大鼠在同等條件下飼養(yǎng)，未予任何處理。然后對針刺組大鼠進(jìn)行針刺治療，患側(cè)針

2、刺組以患側(cè)肩髃、曲池、合谷、三陰交、足三里、環(huán)跳為主，健側(cè)針刺組以健側(cè)的肩髃、曲池、合谷、三陰交、足三里、環(huán)跳為主，雙側(cè)針刺組對兩側(cè)肢體都進(jìn)行針刺治療，穴位如上，均留針30min，其間每l0min行針1次。每天針刺1次，一個(gè)星期針刺治療6天，休息1天，一個(gè)星期為1個(gè)療程。經(jīng)過針刺治療后，選取5個(gè)時(shí)間點(diǎn)（術(shù)后24h、治療第7天、治療第14天、治療第21天、治療第28天）對各組實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能綜合評分，評分后選取4個(gè)時(shí)間點(diǎn)（治療第7天、

3、治療第14天、治療第21天、治療第28天）每組取5只實(shí)驗(yàn)大鼠斷頭取腦，切取健側(cè)皮質(zhì)運(yùn)動(dòng)區(qū)腦組織（前囟前4.5㎜至前囟后0.5㎜）包埋切片，進(jìn)行GAP-43免疫熒光染色，觀察GAP-43表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.各組實(shí)驗(yàn)大鼠的神經(jīng)功能綜合評分
　　模型組和針刺組大鼠Zea-Longa評分、術(shù)后24小時(shí)評分和假手術(shù)組大鼠比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。模型組和針刺組大鼠Zea-Longa評分、術(shù)后24小時(shí)評分

4、差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。針刺組大鼠治療后綜合評分均優(yōu)于模型組（P＜0.05）?；紓?cè)針刺組、健側(cè)針刺組及雙側(cè)針刺組治療第7天、治療第14天、治療第21天、治療第28天和術(shù)后24h比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。治療第7天、治療第14天、治療第21天、治療第28天，患側(cè)針刺組和健側(cè)針刺組進(jìn)行組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；雙側(cè)針刺組與患側(cè)針刺組、健側(cè)針刺組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。治

5、療第14天與治療第7天、治療第21天與治療第14天進(jìn)行組內(nèi)比較，患側(cè)針刺組、健側(cè)針刺組及雙側(cè)針刺組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。治療第28天與治療第21天進(jìn)行組內(nèi)比較，患側(cè)針刺組和健側(cè)針刺組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），雙側(cè)針刺組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.各組實(shí)驗(yàn)大鼠健側(cè)皮質(zhì)運(yùn)動(dòng)區(qū)GAP-43表達(dá)水平
　　假手術(shù)組中GAP-43紅色熒光信號強(qiáng)度微弱（±），可以看到少許信號散在分布于細(xì)胞膜上（如圖2

6、所示）。模型組中GAP-43紅色熒光信號散在于少數(shù)的細(xì)胞膜上且不連續(xù)，紅色熒光信號強(qiáng)度呈弱陽性（±）（如圖3所示）。針刺組中GAP-43紅色熒光信號治療第7天連續(xù)性的表達(dá)在整個(gè)細(xì)胞膜上，紅色熒光信號強(qiáng)度增強(qiáng)，雙側(cè)針刺組還可以看到一些GAP-43陽性細(xì)胞呈現(xiàn)橢圓并且較飽滿的細(xì)胞體，從胞體上發(fā)出一、二根的突起，這是典型的神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)（如圖4所示）。而患側(cè)針刺組和健側(cè)針刺組未觀察到典型的神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)（如圖8、圖12所示）。治療第14天GA

7、P-43紅色熒光信號強(qiáng)度最強(qiáng)，陽性細(xì)胞數(shù)明顯比治療第7天增多，且細(xì)胞形態(tài)呈橢圓形且連續(xù)性緊密排列（如圖5、圖9、圖13所示）。治療第21天可見GAP-43紅色熒光信號強(qiáng)度減弱，連續(xù)性表達(dá)于細(xì)胞膜上，患側(cè)針刺組和健側(cè)針刺組典型的神經(jīng)元細(xì)胞消失（如圖10、圖14所示），雙側(cè)針刺組可見散在的典型的神經(jīng)元細(xì)胞（如圖6所示）。治療第28天GAP-43紅色熒光信號強(qiáng)度繼續(xù)減弱，信號強(qiáng)度接近假手術(shù)組，只能看到少許信號散在分布于細(xì)胞膜上，患側(cè)針刺組和健

8、側(cè)針刺組GAP-43陽性細(xì)胞消失（如圖11、圖15所示），雙側(cè)針刺組GAP-43陽性細(xì)胞呈星點(diǎn)存在（如圖7所示）。
　　3.各組實(shí)驗(yàn)大鼠健側(cè)皮質(zhì)運(yùn)動(dòng)區(qū)GAP-43免疫陽性細(xì)胞數(shù)的相對比值
　　經(jīng)ANOVA分析，各組實(shí)驗(yàn)大鼠GAP-43免疫陽性細(xì)胞數(shù)與細(xì)胞總數(shù)比值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=8.8311，P＜0.05）。說明各組實(shí)驗(yàn)大鼠健側(cè)皮質(zhì)運(yùn)動(dòng)區(qū)GAP-43表達(dá)水平有差異。不同治療療程中針刺組GAP-43免疫陽性細(xì)胞數(shù)明顯大于假

9、手術(shù)組和模型組，患側(cè)針刺組和健側(cè)針刺組 GAP-43 免疫陽性細(xì)胞數(shù)相差不大，雙側(cè)針刺組GAP-43免疫陽性細(xì)胞數(shù)最多且明顯多于其他組。
　　結(jié)論：
　　1.針刺治療可以促進(jìn)腦缺血大鼠神經(jīng)功能的恢復(fù)。與模型組比較，健側(cè)針刺組、患側(cè)針刺組及雙側(cè)針刺組神經(jīng)功能都有明顯的改善，其中雙側(cè)針刺組治療效果更加顯著。所以雙側(cè)針刺組在大鼠的神經(jīng)功能恢復(fù)方面有一定的優(yōu)勢。
　　2.針刺治療可以促進(jìn)腦缺血大鼠健側(cè)皮質(zhì)運(yùn)動(dòng)區(qū)GAP