腦缺血再灌注大鼠GAP-43和RhoA蛋白表達及NEP1-40對其影響.pdf

1、目的：成年哺乳動物中樞神經系統(tǒng)損傷后，機體的功能恢復受到限制，這種功能恢復的限制主要是由于神經軸突再生受限。因此，研究神經軸突再生通路的可塑性及其調節(jié)機制是研究腦缺血再灌注損傷后肢體癱瘓康復機制的核心問題。在脊髓損傷模型中，鞘內注射NgR的競爭性肽段（Nogo extra cellular peptide residues1-40，NEP1-40）可引起皮質脊髓束（corticospinal tract，CST）的顯著芽生和功能改善。N

2、EP1-40用于腦缺血再灌注損傷患者是否同樣有效尚不清楚。本文應用蛋白免疫印跡（Western blot，WB）方法檢測大腦中動脈缺血再灌注（middle cerebral artery ischemia-reperfusion，MCAI/R）模型大鼠缺血灶周邊腦組織生長相關蛋白（Growth-associated protein，GAP-43）和RhoA蛋白表達，結合Montoya設計的“樓梯測試”方法對患肢運動功能進行測試，研究NE

3、P1-40側腦室注射對MCAI/R模型大鼠的軸突再生、患肢功能恢復和RhoA信號通路活動的影響，探討其可能的機制。 方法：（1）采用成年SD雄性大鼠，經“樓梯測試”訓練后，選擇60只左利爪的大鼠隨機分為假手術組、缺血對照組、側腦室注射PBS組和側腦室注射NEP1-40組四組，并在MCAI/R造模前1d和造模后7d、14d和21d分別進行左前肢功能測試。（2）假手術組僅做頸外動脈結扎即縫合皮膚，不做進一步的處理。缺血對照組、側腦室

4、注射PBS組和側腦室注射NEP1-40組大鼠均采用線栓法制作MCAI/R模型。（3）在MCAI/R造模成功后的24h，分別對PBS組和NEP1-40組大鼠進行側腦室注射。（4）用wester blot方法分別在造模后7d、14d、21d檢測各組大鼠缺血灶周邊腦組織GAP-43和RhoA蛋白的表達。 結果：（1）缺血對照組大鼠缺血灶周邊腦組織GAP-43蛋白的表達在造模術后7d最高，14d開始降低但仍高于假手術組大鼠（P<0.05

5、），21d降低至接近假手術組水平（P>0.05）。（2）側腦室注射NEP1-40組大鼠缺血灶周邊腦組織GAP-43蛋白的表達在造模術后7d和14d均高于缺血對照組和側腦室注射PBS組大鼠（P<0.05），其中7d最顯著。（3）缺血對照組大鼠缺血灶周邊腦組織RhoA蛋白表達在造模術后7d最高，14d開始降低，21d最低，但21d仍高于假手術組大鼠（P<0.05）。（4）側腦室注射NEP1-40組大鼠缺血灶周邊腦組織RhoA蛋白在術后各時相

6、點均顯著低于缺血對照組和側腦室注射PBS組大鼠（P<0.05）。（5）各組大鼠在MCAI/R造模術前1d左前肢抓取能力比較無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。缺血對照組大鼠，側腦室注射PBS組大鼠和側腦室注射NEP1-40組大鼠在造模術后各時相點“樓梯測試”結果呈相同變化趨勢；側腦室注射NEP1-40大鼠在造模術后各時相點“樓梯測試”結果均顯著高于缺血對照組和側腦室注射PBS組大鼠（P<0.05）。 結論：（1）缺血性腦損傷急性期和恢

7、復期GAP-43和RhoA蛋白表達同步上調。（2）NEP1-40側腦室注射能促進GAP-43蛋白表達同時抑制RhoA蛋白表達。（3）NEP1-40側腦室注射能促進中樞神經系統(tǒng)損傷后軸突的再生和運動功能改善。（4）這些研究發(fā)現(xiàn)提示NEP1-40可通過促進GAP-43蛋白的表達，同時抑制RhoA蛋白的表達，最終促進腦缺血再灌注大鼠損傷后神經軸突的再生和患肢功能的恢復，顯示出其對腦梗死的治療潛力。NEP1-40促進神經軸突的再生和運動功能康復