大鼠腦缺血再灌注后IRE1通路XBP1、CHOP基因表達(dá)及參芎對(duì)其影響.pdf

1、背景與目的:
　　腦缺血再灌注損傷引起的細(xì)胞死亡包括凋亡和死亡兩種,遲發(fā)性神經(jīng)細(xì)胞損傷多以凋亡的形式出現(xiàn)。近來(lái)研究表明缺血性腦損傷時(shí)細(xì)胞的凋亡不僅存在線(xiàn)粒體途徑及死亡受體途徑還存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑。在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)中,IRE1介導(dǎo)的UPR信號(hào)通路很重要,它不僅誘導(dǎo)的XBP1的表達(dá),還通過(guò)誘導(dǎo)凋亡因子如CHOP的表達(dá)啟動(dòng)細(xì)胞凋亡。XBP1是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的標(biāo)志物。目前在腦缺血再灌注模型中有關(guān)IRE1介導(dǎo)的UPR信號(hào)通路的研究較少見(jiàn)。本研究第一

2、部分通過(guò)檢測(cè)局灶性腦缺血后XBP1、CHOP基因在大鼠腦內(nèi)的表達(dá)變化,以探討它們?cè)谀X缺血損傷中的作用及其與細(xì)胞凋亡的關(guān)系,從而為了解腦缺血后細(xì)胞凋亡的分子調(diào)控機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ);第二部分應(yīng)用參芎對(duì)大鼠MCAO模型進(jìn)行干預(yù),研究參芎對(duì)ERS后IRE1通路XBP1、CHOP基因表達(dá)的影響及神經(jīng)保護(hù)機(jī)制,從而為臨床治療腦缺血提供理論基礎(chǔ)和治療思路。
　　方法:
　　實(shí)驗(yàn)第一部分將10-12周齡健康雄性144只雄性SD大鼠隨機(jī)分為兩組

3、:假手術(shù)組、手術(shù)組;實(shí)驗(yàn)第二部分隨機(jī)使用健康雄性SD大鼠72只分為參芎組。采用線(xiàn)栓法制作大腦中動(dòng)脈缺血再灌注模型,用Longa’s的5級(jí)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分法評(píng)價(jià)神經(jīng)功能缺損。再灌注后6h、12h、24h、72h處死動(dòng)物,TTC染色測(cè)定腦梗死體積,免疫組化學(xué)及RT-PCR法分別檢測(cè)腦缺血區(qū)XBP1、CHOP蛋白和mRNA表達(dá)變化;末端標(biāo)記法原位檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果:
　　1.大鼠MCAO模型腦梗死體積及神經(jīng)細(xì)胞凋亡隨再灌注時(shí)間增

4、加而增加,均在24h達(dá)到高峰。
　　2.XBP1、CHOP蛋白及mRNA水平在再灌注后均有升高,其中XBP1、CHOP mRNA分別在再灌注后6h、12h達(dá)到高峰;XBP1、CHOP蛋白在灌注12h、24h達(dá)到高峰。
　　3.再灌注后12h、24h、72h參芎干預(yù)組腦梗死體積、神經(jīng)功能評(píng)分及神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)均低于對(duì)照組,兩者之間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P<0.05。
　　4.再灌注后6h、12h、24h、72h參芎干預(yù)組XBP

5、1、CHOP蛋白及mRNA低于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照組大鼠,兩組之間比較P<0.01。
　　結(jié)論:
　　1.腦缺血再灌注后,可誘發(fā)了ERS,啟動(dòng)了IRE1介導(dǎo)的UPR信號(hào)通路。
　　2.大鼠腦缺血再灌注后,CHOP其動(dòng)態(tài)變化與神經(jīng)凋亡相平行,可能在神經(jīng)細(xì)胞凋亡中發(fā)揮作用。
　　3.參芎注射液可改善腦缺血再灌注后大鼠神經(jīng)功能缺損并減少大鼠腦梗死體積。
　　4.參芎注射液可下調(diào)XBP1、CHOP的表達(dá),抑制了IRE1