HIF-1α與Th17-Treg失衡對(duì)煙霧暴露哮喘大鼠氣道炎癥的影響及西羅莫司治療作用的研究.pdf

1、目的:近年研究證明吸煙的支氣管哮喘(簡(jiǎn)稱哮喘)患者較非吸煙哮喘患者急性發(fā)作次數(shù)更多、肺功能減退更快、激素治療反應(yīng)較差、甚至可能突然死亡。本研究擬通過建立煙霧暴露哮喘大鼠模型,探討缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)與Th17/Treg細(xì)胞失衡對(duì)煙霧暴露哮喘大鼠氣道炎癥的影響,觀察西羅莫司對(duì)煙霧暴露哮喘的治療效果及其作用機(jī)制,以降低哮喘發(fā)病率和死亡率。
　　方法:
　　1.建立煙霧暴露哮喘大鼠模型及分組:
　?、僬?duì)照組

2、;
　　②吸煙組;
　?、巯M;
　?、軣熿F暴露哮喘組。
　　各組模型建立后處死大鼠取肺組織行病理HE染色,分析氣道周圍炎癥反應(yīng)積分,對(duì)中性粒細(xì)胞和嗜酸粒細(xì)胞炎癥程度進(jìn)行評(píng)分。
　　2.HIF-1α與Th17/Treg失衡對(duì)煙霧暴露哮喘大鼠氣道炎癥的影響及相關(guān)性研究:
　?、欧謩e采用RT-PCR及Western-blot免疫印跡方法檢測(cè)以上4組肺組織HIF-1α、RORγt及FoxP3的mRNA和蛋

3、白表達(dá);
　?、撇捎昧魇郊?xì)胞儀檢測(cè)以上4組脾臟單個(gè)核細(xì)胞中Th17與Treg細(xì)胞的數(shù)量及Th17/Treg比值并比較各組分化差異;
　?、窍嚓P(guān)性和回歸分析。
　　3.西羅莫司對(duì)煙霧暴露哮喘氣道炎癥的治療作用及其機(jī)制的研究:
　　建立煙霧暴露哮喘大鼠模型并觀察西羅莫司對(duì)氣道炎癥的治療作用,分組如下:
　?、僬?duì)照組;
　?、跓熿F暴露哮喘組;
　?、蹮熿F暴露哮喘西羅莫司治療組。
　　西羅莫司

4、治療劑量為0.45mg/kg體重,連續(xù)2周。各組大鼠處死后觀察指標(biāo)及方法同2。
　　結(jié)果:
　　1.建立煙霧暴露哮喘大鼠模型及氣道炎癥細(xì)胞積分分析:
　　煙霧暴露哮喘大鼠的肺組織病理以中性粒細(xì)胞為主的氣道炎癥。與吸煙組及哮喘組相比,煙霧暴露哮喘組的氣道中性粒細(xì)胞炎癥積分顯著增高(P<0.05),且中性粒細(xì)胞炎癥積分顯著高于嗜酸粒細(xì)胞炎癥積分(P<0.05)。
　　2.HIF-1α與Th17/Treg失衡對(duì)煙霧暴露

5、哮喘大鼠氣道炎癥的影響及相關(guān)性研究:
　?、艧熿F暴露哮喘組肺組織HIF-1α、RORγt的mRNA和蛋白及RORγt/FoxP3比值均增加而FoxP3mRNA和蛋白均下降(p<0.05)。
　?、茻熿F暴露哮喘組脾臟Th17及Th17/Treg比值升高而Treg細(xì)胞下降(p<0.05)。
　?、窍嚓P(guān)性分析:
　　①肺組織RORγt/FoxP3比值與中性粒細(xì)胞炎性積分存在正相關(guān)(r=0.69,P<0.05);

6、　?、诜谓M織HIF-1α蛋白與RORγt/FoxP3比值存在正相關(guān)(r=0.60,P<0.05)。
　　3.西羅莫司治療后,肺組織中性粒細(xì)胞炎癥減輕,肺組織HIF-1α蛋白與RORγt/FoxP3比值下降,脾臟Th17及Th17/Treg比值顯著下降(p<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.成功建立煙霧暴露哮喘大鼠模型,提示煙霧暴露哮喘氣道炎癥以中性粒細(xì)胞浸潤為主。
　　2.煙霧暴露哮喘大鼠HIF-1α表達(dá)上調(diào)可能