妊娠期高鹽飲食重編程血管緊張素系統(tǒng)介導(dǎo)的成年子代心肌凋亡.pdf

1、第一部分妊娠期高鹽飲食對(duì)子代心臟發(fā)育和RAS的影響
　　【目的】妊娠期高鹽飲食可改變子代心臟組織的結(jié)構(gòu)，這種改變可能會(huì)影響心臟的功能而增加成年子代罹患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。本課題主要著眼于研究妊娠期高鹽飲食對(duì)子代心臟發(fā)育及RAS的影響。
　　【方法】采用本實(shí)驗(yàn)室已建立的妊娠期高鹽飲食模型。將妊娠第一天的清潔級(jí)SD大鼠隨機(jī)分為正常組和高鹽組。在妊娠期的第4～21天分別給予常規(guī)飼養(yǎng)（含1%NaCl飼料）和高鹽飼料（含8%NaCl飼料

2、）。妊娠期其余時(shí)間及分娩后均給予母鼠常規(guī)飼料喂養(yǎng)，子代在斷奶（出生4周）后至成年皆以常規(guī)飼料喂養(yǎng)。稱量?jī)山M在新生期（出生2天）、青少年期（1月齡）以及成年期（5月齡）三個(gè)時(shí)間段的心臟重量、身體重量，透射電鏡法觀察心臟組織的超微結(jié)構(gòu)變化。采用放射免疫化學(xué)法檢測(cè)外周RAS中各主要組分的表達(dá)情況，通過免疫組化法和Western blot法測(cè)三個(gè)時(shí)間段心臟組織中AT1與AT2的分布與表達(dá)。
　　【結(jié)果】妊娠期高鹽飲食成年子代心臟重量/身體

3、重量的比值明顯增高，電鏡下觀察心臟組織中線粒體內(nèi)嵴減少，呈現(xiàn)“空泡樣”變。放射免疫法測(cè)得外周 RAS中的AngⅡ和ACE在新生期有明顯下調(diào)現(xiàn)象。心肌組織中AT1的表達(dá)從新生期至成年期持續(xù)性顯著增高，AT2的表達(dá)只在成年期出現(xiàn)顯著性增高。
　　【結(jié)論】妊娠期高鹽飲食對(duì)子代的心臟發(fā)育有重編程作用，對(duì)子代外周 RAS表達(dá)及心臟中AT1與AT2的分布有一定的影響。
　　第二部分妊娠期高鹽成年子代心肌凋亡表達(dá)及相關(guān)的細(xì)胞信號(hào)通路

4、>　　【目的】通過在體和離體實(shí)驗(yàn)，研究RAS異常表達(dá)與心肌細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系，并進(jìn)一步探究相關(guān)的細(xì)胞信號(hào)通路。
　　【方法】采取DNA末端原位染色法（TUNEL）對(duì)妊娠期高鹽飲食的成年心臟凋亡小體進(jìn)行定量分析；通過瓊脂糖凝膠電泳（DNA ladder）對(duì)心臟組織進(jìn)行凋亡檢測(cè)；以心肌母細(xì)胞H9C2細(xì)胞株為離體實(shí)驗(yàn)對(duì)象，加入AngⅡ以及AT2特異性激動(dòng)劑CGP42112A，觀察誘發(fā)凋亡的情況。以流式細(xì)胞儀（Flow Cytometer

5、）和DNA ladder檢測(cè)凋亡細(xì)胞比例和DNA碎片分布。使用線粒體抽提試劑盒，分離出組織及細(xì)胞的線粒體和胞漿，通過Western blot法檢測(cè)凋亡信號(hào)通路上的相關(guān)蛋白表達(dá)。
　　【結(jié)果】第一部分電鏡結(jié)果已證明成年子代心臟組織線粒體內(nèi)脊減少、呈現(xiàn)“空泡樣”變。TUNEL法證實(shí)妊娠期高鹽成年子代心肌間凋亡小體表達(dá)明顯增多，瓊脂糖凝膠電泳出現(xiàn)約180-200bp間距的凋亡細(xì)胞典型的DNA梯狀條帶。離體實(shí)驗(yàn)中，流式細(xì)胞及DNA lad

6、der實(shí)驗(yàn)證實(shí)AngⅡ參與心肌凋亡主要是通過AT2途徑。心臟組織Western blot結(jié)果說明AⅡ誘導(dǎo)的凋亡是由Bax移位至線粒體，釋放出細(xì)胞色素C（cytochrome C）至胞質(zhì)，激活caspase-3通路而產(chǎn)生。細(xì)胞Western blot結(jié)果顯示，隨著AT2的激動(dòng)劑CGP42112A濃度升高，caspase-3、cytochrome C在胞質(zhì)中表達(dá)增高，cytochrome C在線粒體中表達(dá)降低，此過程可被AT2拮抗劑PD12