社區(qū)獲得性耐甲氧西林金黃色葡萄球菌臨床株遺傳學(xué)分析.pdf

1、目的：了解天津地區(qū)CA-MRSA臨床株的遺傳學(xué)特點(diǎn)，包括：檢測(cè)它們的耐藥表型、pvl基因的攜帶情況、SCCmec分型和MLST分型，為臨床診斷、預(yù)防和治療奠定基礎(chǔ)。 方法：(1)菌株收集與藥敏檢測(cè)：收集自2001年-2006年天津市四家三級(jí)甲等醫(yī)院金葡菌，其中15株金葡菌鼻腔攜帶株、125株金葡菌臨床株。依據(jù)CA-MRSA的概念將臨床株分成CA-MRSA和醫(yī)院獲得MRSA(HA-MRSA)。采用頭孢西丁紙片法，檢測(cè)MRSA。應(yīng)用

2、微量肉湯稀釋法檢測(cè)金葡菌對(duì)12中抗生素(包括：青霉素、苯唑西林、氨芐西林、環(huán)丙沙星、莫西沙星、頭孢唑啉、氯霉素、林可霉素、慶大霉素、頭孢曲松、萬(wàn)古霉素和紅霉素)的MIC，分析其耐藥率。(2)金葡菌的pvl篩檢：應(yīng)用PCR方法，對(duì)全部金葡菌檢測(cè)pvl基因，并對(duì)PCR陽(yáng)性的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DNA序列分析。(3)金葡菌的SCCmec分型：參照Olivera等[26]的文獻(xiàn)報(bào)道合成引物。對(duì)CA-MRSA和HA-MRSA菌株應(yīng)用多重PCR方法，進(jìn)行S

3、CCmec分型。(4)金葡菌的MLST分析：擴(kuò)增金葡菌的7個(gè)高度保守的看家基因，將擴(kuò)增的序列片段進(jìn)行DNA序列分析。將分析結(jié)果提交國(guó)際數(shù)據(jù)庫(kù)網(wǎng)站http：//saureus.mlst.net進(jìn)行比對(duì)，最終獲得菌株ST分型。 結(jié)果：(1)MRSA的檢測(cè)：132例健康查體者鼻腔攜帶菌株中，篩檢出15例金葡菌攜帶株。金葡菌攜帶率為11.36％。其中，經(jīng)頭孢西丁紙片法檢測(cè)，15例攜帶株均為MSSA。在健康查體者中，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)MRSA鼻腔攜

4、帶株。在125株金葡菌臨床株中MRSA54株，依據(jù)臨床資料分成12株CA-MRSA和42株HA-MRSA。應(yīng)用微量肉湯稀釋法，檢測(cè)對(duì)12種抗生素的MIC。其中，42株HA-MRSA除對(duì)萬(wàn)古霉素敏感外，對(duì)其他11種抗生素均有較高的耐藥率，呈現(xiàn)多重耐藥的表型。而12株CA-MRSA除對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素有很高的耐藥率外，對(duì)非β一內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素耐藥率較低。在15株攜帶株中，對(duì)青霉素耐藥率較高，對(duì)林可霉素和紅霉素也有中等程度的耐藥，對(duì)其他類(lèi)抗生

5、素仍較敏感。(2)pvl基因PCR方法檢測(cè)：檢測(cè)125株臨床株和15株攜帶株的pvl基因。結(jié)果僅檢出pvl基因陽(yáng)性菌株3株。pvl基因檢出率較低(3/140)。其中1株是從CA-MRSA中檢出，來(lái)自膿液，另外2株為MSSA，來(lái)自痰液。(3)SCCmec分型：用多重PCR方法，對(duì)12株CA-MRSA和42株HA-MRSA進(jìn)行SCCmec分型。在12株CA-MRSA中，除1株未定型外，其余11株均屬于SCCmecIV型；在42株HA-MRS

6、A中，以SCCmecIII型和IIIa型較多，分別為10株和16株，其次為SCCmecII型7株和SCCmecIIIb型6株，還有3株未定型。沒(méi)有發(fā)現(xiàn)SCCmecI型菌株。(4)MLST分型：對(duì)pvl基因陽(yáng)性的CA-MRSA臨床株6Saul，進(jìn)行MLST分型。屬于ST88。該菌株來(lái)自膿液。 結(jié)論：1、健康者鼻腔攜帶菌株中，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)CA-MRSA。在54株MRSA臨床株中，發(fā)現(xiàn)12株CA-MRSA。2、應(yīng)用臨床藥敏實(shí)驗(yàn)、PCR法篩