載血卟啉脂質(zhì)微泡的制備與治療兔肝VX2腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤。目前肝癌首選的治療方案仍然是手術(shù)切除，但手術(shù)切除率低，術(shù)后復(fù)發(fā)率高，因此化療常常是可供選擇的主要治療方法和手段。腫瘤化療藥物大多為細(xì)胞毒性藥物，對惡性腫瘤細(xì)胞和正常組織細(xì)胞缺乏特異性和靶向性，具有較大的毒副作用。因此尋求一種簡便、安全、有效、可重復(fù)使用的局部化療技術(shù)是研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。聲動(dòng)力療法是利用超聲具有深部穿透并能聚焦于腫瘤局部的能力，化學(xué)激活相對無毒的聲敏劑分子，產(chǎn)生單線態(tài)氧和（或）自由基，有

2、針對性地殺傷腫瘤細(xì)胞，被認(rèn)為是一種很有推廣前景的物理療法，但存在聲敏劑在組織內(nèi)分布不理想的缺點(diǎn)。最近研究發(fā)現(xiàn)，超聲靶向破壞載藥微泡定位釋放技術(shù)是一種新型無創(chuàng)的靶向治療技術(shù)，可以使藥物在靶組織內(nèi)局部釋放并能促使藥物進(jìn)入靶細(xì)胞內(nèi)，為克服聲動(dòng)力療法的不足提供了新的思路。近幾年，聲動(dòng)力治療學(xué)和超聲靶向破壞載藥微泡定位釋放技術(shù)的研究都取得巨大的進(jìn)步，且產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)的基礎(chǔ)均為空化效應(yīng)，因此我們試想利用微泡破裂所致的空化效應(yīng)增強(qiáng)血卟啉的聲動(dòng)力效果。

3、因此本研究旨在制備出一種新型的載血卟啉的脂質(zhì)超聲微泡造影劑，檢測其粒徑大小、濃度、穩(wěn)定性、包封率、顯像效果以及進(jìn)行聯(lián)合應(yīng)用超聲和載血卟啉微泡治療兔肝VX2腫瘤療效的觀察與機(jī)理的探討，為超聲介導(dǎo)載聲敏劑微泡在特定組織內(nèi)的藥物治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。本課題研究主要包括以下兩個(gè)部分的內(nèi)容： 第一部分載血卟啉脂質(zhì)微泡的制備及一般特性研究 目的：制備一種載聲敏劑的脂質(zhì)超聲微泡并測定其粒徑大小、濃度、包封率、觀察其體內(nèi)超聲顯像效果。

4、 方法：采用機(jī)械振蕩的方法制備載血卟啉的脂質(zhì)超聲微泡，用熒光分光光度儀測定其包封率，用倒置顯微鏡及馬爾文激光粒徑測量儀測量粒徑大小、分布和Zeta電位；觀察60Coγ射線滅菌前后造影劑外觀、形態(tài)、濃度和平均粒徑的改變，并觀察其在兔肝內(nèi)的顯像效果。 結(jié)果：載藥脂質(zhì)微泡的濃度為（3.24±0.49）×109/ml，粒徑范圍為1.5～5.3μm，平均粒徑為2.8±0.4μm；載血卟啉脂質(zhì)微泡的包封率為30.25±4.45％；Zeta

5、電位為-（15.4±2.4）mV。經(jīng)60Coγ，射線滅菌后觀察微泡形態(tài)、粒徑及包封率無明顯變化，其平均粒徑大小及包封率分別為2.2±0.3μm，27.39±2.91％。靜脈注射此載藥微氣泡后，小鼠肝臟可見良好、持續(xù)的增強(qiáng)顯像效果。 結(jié)論：采用機(jī)械振蕩法制備的載血卟啉脂質(zhì)微泡，包封率較高，粒徑分布均一，體內(nèi)顯像效果好，有望實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)監(jiān)控下的體內(nèi)定點(diǎn)靶向給藥。 第二部分超聲聯(lián)合載血卟啉微泡治療兔肝VX2腫瘤的試驗(yàn)研究

6、第一節(jié)免肝VX2腫瘤模型的建立及超聲監(jiān)測口 目的：探討兔肝VX2腫瘤模型的建立方法及超聲檢查對腫瘤的監(jiān)測。 方法：采用瘤塊肝內(nèi)種植法建立兔肝VX2腫瘤模型，病理解剖驗(yàn)證VX2瘤株在兔肝臟的成瘤情況；用2DUS、CDFI及CEUS觀察腫瘤的大小、回聲、血流灌注及生長特點(diǎn)，從而評估超聲在兔肝VX2腫瘤模型監(jiān)測中的應(yīng)用價(jià)值。 結(jié)果：采用瘤塊移植法成功建立起穩(wěn)定的兔肝VX2腫瘤模型，成瘤率為93.33％；超聲能準(zhǔn)確測量腫

7、瘤的大小，能實(shí)時(shí)、準(zhǔn)確地監(jiān)測肝內(nèi)腫瘤的回聲變化及腫瘤血管的分布情況；腫瘤的聲學(xué)造影特點(diǎn)為典型的“快進(jìn)快出”。 結(jié)論：瘤塊移植法是一種操作簡單、成瘤率高的建立兔肝VX2腫瘤模型的方法；超聲檢查能準(zhǔn)確、方便、無創(chuàng)地監(jiān)測兔肝VX2腫瘤的生長；超聲檢查為利用該模型評價(jià)治療肝癌的新技術(shù)的療效提供了有效的監(jiān)測方法。 第二節(jié)超聲定位輻照載血卟啉微泡治療兔肝VX2腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究 目的：研究超聲定位輻照載血卟啉微泡介導(dǎo)藥物靶向釋放

8、技術(shù)對兔VX2肝移植瘤的治療效果。 方法：35只新西蘭大白兔，于肝左葉內(nèi)植入VX2腫瘤組織塊，建立肝移植瘤模型。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分成7組，每組5只，包括①超聲定位輻照載血卟啉微泡組（US+LMLH）、②超聲定位輻照血卟啉組（US+HP）、③超聲定位輻照空白脂質(zhì)微泡組（US+MB）、④單純載血卟啉微泡組（LMLH）、⑤單純血卟啉組（HP）、⑥單純超聲輻照組（US）和⑦生理鹽水對照組（C）。治療前后用2DUS、CDFI及CEUS觀察腫瘤

9、的大小、回聲及血流灌注情況，計(jì)算腫瘤體積大小及生長抑制率；同時(shí)觀察不同處理組肝內(nèi)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況；并用透射電鏡觀察腫瘤細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，免疫組化法檢測腫瘤組織CD34及PCNA的表達(dá)，TUNEL試劑盒檢測腫瘤細(xì)胞的凋亡情況。 結(jié)果：US+LMLH組腫瘤內(nèi)部呈混合回聲，CDFI及CEUS顯示腫瘤的滋養(yǎng)血管明顯減少，生長抑制率高于其他各組；在肝內(nèi)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移方面，US+LMLH組明顯優(yōu)于其他各組；超微結(jié)構(gòu)顯示US+LMLH組細(xì)胞膜破壞