初發(fā)1型糖尿病患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞FOXP3和CTLA-4表達(dá)的研究.pdf

1、目的：
　　研究初發(fā)1型糖尿?。╰ype1diabetesmellitus，T1DM）患兒外周血叉狀頭轉(zhuǎn)錄因子(Foxheadtranscriptionfactor3，F(xiàn)OXP3)和細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原-4（cytotoxicT-lymphocyteantigen-4，CTLA-4）表達(dá)，及患兒血清可溶性FOXP3和CTLA-4蛋白水平的變化，并觀察其在不同1型糖尿病抗體、不同年齡組及T淋巴細(xì)胞亞群之間的表達(dá)差異，比較其與糖化

2、血紅蛋白(HbA1c)及C肽的相關(guān)性，探討它們在1型糖尿病發(fā)病中所起的作用。
　　方法：
　　糖尿病組:選取初發(fā)T1DM患兒50例，男23例，女27例，年齡3-14歲，平均（8.8±2.9）歲;均符合ADA診斷標(biāo)準(zhǔn)，既往健康。對照組:健康兒童30例，男18例，女12例，年齡3-14歲，平均(8.2±2.8)歲，近期無感染史，無糖尿病家族史;均留取空腹靜脈血3ml，抗凝，置-70℃保存。糖尿病患兒常規(guī)檢測1型糖尿病抗體、T淋巴

3、細(xì)胞亞群、HbA1c和C肽等項(xiàng)指標(biāo)。標(biāo)本解凍后提取mRNA，逆轉(zhuǎn)錄獲取總cDNA，用real-timePCR法研究FOXP3和CTLA-4mRNA表達(dá);ELISA方法檢測血清中可溶性FOXP3和CTLA-4蛋白水平。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，多個(gè)樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析，組間數(shù)據(jù)兩兩比較采用LSD-t法，兩變量的相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)分析，P＜0.05為差

4、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　糖尿病患兒FOXP3mRNA表達(dá)低于對照組（0.95±0.48vs2.11±0.79，P＜0.01）;其血清可溶性FOXP3蛋白濃度亦低于對照組（6.27±1.49ng/mlvs9.02±2.37ng/ml，P＜0.01）;糖尿病患兒CTLA-4mRNA表達(dá)高于對照組（2.43±0.83vs1.94±0.84，P＜0.01）;其血清可溶性CTLA-4蛋白濃度亦高于對照組（77.88±22.3

5、4ng/mlvs65.97±12.11ng/ml，P＜0.01）。Pearson相關(guān)分析顯示糖尿病患兒FOXP3和CTLA-4基因與蛋白表達(dá)均呈正相關(guān)（r=0.758，0.396;P＜0.05）;且FOXP3與CTLA-4蛋白表達(dá)有相關(guān)性（r=-0.624;P＜0.05）;糖尿病患兒FOXP3和CTLA-4mRNA及蛋白表達(dá)與HbA1c和C肽均無相關(guān)性(P＞0.05)。糖尿病患兒不同1型糖尿病抗體、不同年齡組之間外周血中FOXP3和CT

6、LA-4基因及蛋白表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。1型糖尿病抗體陽性組B淋巴細(xì)胞所占比例高于抗體陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　初發(fā)1型糖尿病患兒外周血FOXP3和CTLA-4基因與蛋白表達(dá)較對照組發(fā)生明顯變化，且基因與蛋白表達(dá)均有相關(guān)性，提示通過調(diào)節(jié)兩者基因及蛋白水平參與1型糖尿病的發(fā)病過程;我們的研究數(shù)據(jù)表明FOXP3與CTLA-4蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，支持CTLA-4控制FOXP3在調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregul