急性白血病患兒單個核細(xì)胞Ndrg1基因表達(dá)情況及其意義.pdf

1、前言 Ndrg1(N-myc downstream regulated gene 1)基因定位于8號染色體，受上游N-Myc基因調(diào)控。目前研究表明，Ndrg1具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和分化等多種生物學(xué)功能。各種惡性實體腫瘤和惡性腫瘤細(xì)胞株Ndrg1表達(dá)水平顯著降低，并與腫瘤分化程度、腫瘤轉(zhuǎn)移能力和臨床預(yù)后密切相關(guān)，已公認(rèn)為一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因和抑癌基因，但目前國內(nèi)外尚無關(guān)于兒童急性白血病Ndrg1表達(dá)情況的臨床研究報道。 目的

2、 研究兒童急性白血病Ndrg1基因表達(dá)情況，分析比較不同危險度ALL患者單個核細(xì)胞Ndrg1基因表達(dá)水平，探討Ndrg1表達(dá)水平與ALL臨床預(yù)后和治療反應(yīng)的關(guān)系，為指導(dǎo)臨床個體化治療奠定理論基礎(chǔ)。 方法 以我院兒童血液腫瘤科2004年6月～2006年12月收治的65例新發(fā)急性白血病患兒為實驗對象，其中ALL41例，AML24例。對照組為我院門診常規(guī)體檢兒童，共12名。收集研究對象骨髓或外周血抗凝標(biāo)本，密度梯度離心法

3、提取制備單個核細(xì)胞，Trizol試劑提取單個核細(xì)胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行熒光定量PCR。根據(jù)樣本熒光定量PCR動力曲線確定目標(biāo)基因Ndrg1和管家基因GAPDH的Ct值，對照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線確定樣本Ndrg1和GAPDH基因起始拷貝數(shù)(表達(dá)水平)。以規(guī)一化Ndrg1值([起始拷貝數(shù)<,Ndrg1>/起始拷貝數(shù)<,GAPDH>]×100)判斷Ndrg1基因mRNA相對表達(dá)水平。結(jié)果1、以HL-60細(xì)胞Ndrg1和GAPDH普通PCR擴(kuò)增產(chǎn)物

4、10倍梯度稀釋制成的系列標(biāo)準(zhǔn)品為模板行熒光定量PCR，根據(jù)系列稀釋標(biāo)準(zhǔn)品起始拷貝數(shù)和Ct值繪制的Ndrgl和GAPDH的標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸系數(shù)分別為0.996和0.999，說明在本實驗設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋濃度范圍內(nèi)，熒光定量PCR動力曲線Ct值與模板起始拷貝數(shù)間具有良好線性關(guān)系，因此可通過熒光定量PCR在本研究設(shè)定的實驗條件下準(zhǔn)確測定臨床樣本Ndrgl和管家基因GAPDH表達(dá)水平。 2、盡管正常對照組、ALL組、AML組，以及AL組

5、外周血單個核細(xì)胞歸一化Ndrg1值的中位數(shù)均高于相應(yīng)骨髓單個核細(xì)胞歸一化Ndrg1值的中位數(shù)，但經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，各組外周血和骨髓單個核細(xì)胞Ndrg1表達(dá)水平無顯著性差異(P>0.05)。 3、 AL單個核細(xì)胞Ndrgl表達(dá)水平(歸一化Ndrg1值的中位數(shù)為0.19)顯著低于對照組(歸一化Ndrg1值的中位數(shù)為0.41)(P=0.02)。ALL和AML組歸一化Ndrg1的中位數(shù)分別為0.17和0.19，也顯著低于對照組，但ALL和A

6、ML間表達(dá)水平無顯著性差異(P=0.591)。 4、潑尼松敏感型ALL患兒單個核細(xì)胞Ndrg1表達(dá)水平顯著高于潑尼松不敏感型ALL，歸一化Ndrg1值的中位數(shù)分別為0.29和0.15，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)比較差異具有顯著性(P=0.022)。 5、標(biāo)危組ALL單個核細(xì)胞Ndrg1表達(dá)水平顯著高于高危組ALL，兩組歸一化Ndrg1值的中位數(shù)分別為0.25和0.13(P=0.034)。 6、 ALL-L3單個核細(xì)胞Ndrg1表達(dá)水平低于

7、L1和L2，可能與L3白血病細(xì)胞增殖旺盛、臨床進(jìn)展迅猛有關(guān)。 結(jié)論 1、急性白血病患兒單個核細(xì)胞Ndrg1表達(dá)水平顯著低于對照組外周血單個核細(xì)胞，提示Ndrg1作為一種抑癌基因和腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因在白血病發(fā)生發(fā)展方面可能具有重要作用。 2、研究結(jié)果表明，Ndrg1表達(dá)量與兒童ALL臨床危險度、潑尼松試驗敏感性等預(yù)后因素和治療反應(yīng)密切相關(guān)。潑尼松敏感和低危組ALL患者Ndrg1表達(dá)水平顯著高于潑尼松不敏感者和高危組患

8、者，高度提示Ndrg1是反映ALL預(yù)后和治療反應(yīng)的重要分子生物學(xué)指標(biāo)，在ALL預(yù)后判斷和指導(dǎo)個體化治療方面可能具有重要應(yīng)用價值。 3、ALL-L3單個核細(xì)胞Ndrg1表達(dá)水平顯著低于L1和L2，很可能與L3白血病細(xì)胞增殖能力強(qiáng)、臨床進(jìn)展快有關(guān)。由于Ndrg1具有抑制細(xì)胞分化的作用，而且在細(xì)胞周期S期表達(dá)水平較低，G0和G1期表達(dá)較高，推測目前采用烷化劑(細(xì)胞周期非特異性化療藥物)為主的聯(lián)合化療治療L3和Burrkit淋巴瘤療效顯