烏司他丁在變應性鼻炎中的治療作用及其與HO-1關系的研究.pdf

1、目的:
　　 變應性鼻炎是臨床常見慢性疾病，研究表明，變應性鼻炎的發(fā)病不僅僅是傳統(tǒng)觀念所認為的IgE介導的鼻黏膜Ⅰ型變態(tài)反應，而且是易感個體接觸致敏變應原后導致的包含IgE介導的炎癥遞質(zhì)的釋放和多種免疫活性細胞、Th1/Th2細胞因子的網(wǎng)絡失衡造成的鼻黏膜及黏膜下血管慢性炎癥性疾病。變應性鼻炎全球發(fā)病率約為10％-25％，我國變應性鼻炎的患病率約為9％-24.6％，而且隨著國家工業(yè)發(fā)展，發(fā)病率呈逐年上升趨勢，嚴重影響人們的生活質(zhì)

2、量。
　　 血紅素加氧酶(Hemeoxygenase，HO)是一種微粒體酶，是血紅素降解的起始酶和限速酶，HO-1為其誘導型，近期研究數(shù)據(jù)表明，HO-1基因作為一種保護性基因，其過表達有重要的生物學效應比如，抗氧化應激、抗炎、抗惡性細胞增生、調(diào)節(jié)細胞周期活性以及對Treg細胞的免疫調(diào)節(jié)作用，HO-1對變應性鼻炎具有保護作用。
　　 目前變應性鼻炎的治療多采用激素類藥物，不良反應多，烏司他丁源于人體，不良反應少，臨床上已廣

3、泛應用于胰腺炎、休克、全身炎癥反應等的治療，效果顯著。烏司他丁能抑制炎癥介質(zhì)過度釋放，改善微循環(huán)、組織灌注，抑制組織細胞凋亡，同時可穩(wěn)定細胞膜，抑制蛋白質(zhì)分解代謝亢進，清除體內(nèi)氧自由基，抑制IL-6、IL-8的過度生成及ICAM-1的表達等作用，但是該藥物在變應性鼻炎中尚未應用，在變應性炎癥中的具體作用及機制還有待進一步探討。
　　 鑒于HO-1與烏司他丁均具有免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用，因此本實驗即通過體內(nèi)體外實驗，探討烏司他丁在變應

4、性鼻炎發(fā)病過程中對小鼠及肥大細胞中HO-1蛋白含量表達的影響，并與激素類藥物相比較，烏司他丁是否通過誘導HO-1上調(diào)，達到治療作用，為進一步闡述烏司他丁及HO-1在治療變應性鼻炎中的機制提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 40只FVB系SPF級小鼠隨機分為空白對照組(con)、AR模型組(OVA)、地塞米松干預組(OVA+Dex)、烏司他丁干預組(OVA+UTI)，AR模型組采用10％卵清蛋白(ovalbumin，OVA

5、)進行致敏，建立變應性鼻炎小鼠模型，地塞米松干預組和烏司他丁干預組局部激發(fā)前腹腔注射地塞米松及烏司他丁。行為學觀察對模型進行評價。末次激發(fā)后麻醉、取血，用ELISA法測定血清中IL-4、INF-γ、OVA特異性IgE含量;收集鼻腔灌洗液(Nasallavagefluid，NLF)，用于炎性細胞計數(shù);用WesternBlot法測定肺組織HO-1的蛋白含量;鼻組織固定、包埋，行HE染色和免疫組織化學染色，觀察鼻組織黏膜形態(tài)學改變和HO-1蛋

6、白的表達情況。同時體外培養(yǎng)小鼠肥大細胞分為正常組(con)、炎癥模型組（TNF-α組）、地塞米松干預組(TNF-α+Dex)、烏司他丁干預組（TNF-α+UTI），收集上清液檢測類胰蛋白酶活力，收集細胞分別行免疫熒光、ROS檢測、Westernblot、RT-PCR對烏司他丁在肥大細胞炎癥模型中的作用以及HO-1蛋白在各組肥大細胞中的表達情況進行比較，并探討在肥大細胞中HO-1對烏司他丁是否存在時間及劑量依賴性。
　　 結果:<

7、br>　　 1、烏司他丁可以明顯改善變應性鼻炎小鼠鼻部癥狀
　　 AR模型組中10只小鼠均建模成功，鼻部出現(xiàn)變應性鼻炎典型的癥狀，行為學觀察疊加記分均＞5分;與AR組相比，地塞米松干預組、烏司他丁干預組癥狀明顯減輕，疊加記分均＜5分;對照組沒有變應性鼻炎癥狀。
　　 2、烏司他丁對變應性鼻炎小鼠氣道黏膜有明顯的保護作用
　　 空白對照組鼻黏膜層次分明，無明顯炎癥改變;AR組鼻黏膜可見不同程度水腫，少量上皮細胞剝

8、脫，杯狀細胞體積大，腺體增生，黏膜下嗜酸性粒細胞、淋巴細胞和單核細胞浸潤。地塞米松干預組及烏司他丁干預組上述改變明顯減輕。
　　 3、烏司他丁可以明顯抑制變應性鼻炎小鼠鼻腔灌洗液中嗜酸性粒細胞數(shù)量
　　 AR模型組中嗜酸性粒細胞(EOS)數(shù)明顯增多，與其他三組相比有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。地塞米松和烏司他丁干預后，嗜酸性粒細胞明顯下降且與空白對照組存在統(tǒng)計學差異(P＜0.05)
　　 4、烏司他丁可以逆轉(zhuǎn)變應

9、性鼻炎小鼠Th1/Th2細胞因子失衡，降低血清中OVA特異性IgE含量
　　 AR組小鼠血清中IL-4、OVA特異性IgE含量明顯高于其他三組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，且烏司他丁干預組與地塞米松干預組存在統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。IFN-γ在AR組小鼠血清中含量明顯低于其他三組，存在統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，而空白對照組和烏司他丁干預組間無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　 5、烏司他丁可以明顯抑制TNF-

10、α刺激后肥大細胞脫顆粒
　　 肥大細胞在給予TNF-α刺激后，類胰蛋白酶活力明顯增強，明顯高于正常組、烏司他丁干預組和地塞米松干預組且存在統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，而正常組、烏司他丁干預組和地塞米松干預組之間無明顯統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　 6、烏司他丁可以明顯抑制TNF-α刺激后肥大細胞中ROS的表達
　　 肥大細胞正常組中ROS處于低表達狀態(tài)，給予TNF-α刺激后，ROS在肥大細胞中的表達明顯增加，

11、當給與地塞米松、烏司他丁干預后，ROS在肥大細胞中的表達明顯降低，但仍高于正常組。
　　 7、烏司他丁可以誘導變應性鼻炎小鼠鼻黏膜、肺組織以及肥大細胞中HO-1蛋白的表達。
　　 空白對照組與其余三組相比，HO-1蛋白的表達存在統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，且AR模型組與地塞米松干預組、烏司他丁干預組相比存在統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。
　　 8、烏司他丁誘導肥大細胞HO-1基因和蛋白的表達呈時間及劑量依賴性

12、>　　 隨著烏司他丁干預的時間增加，HO-1在肥大細胞中的表達逐漸增加，在4小時明顯增加。烏司他丁干預4小時，隨著烏司他丁濃度的增加，HO-1表達逐漸增加。
　　 結論:
　　 1、烏司他丁具有抑制小鼠氣道嗜酸性粒細胞增多，調(diào)節(jié)Th1/Th2細胞因子失衡等作用，與地塞米松相比，同樣具有免疫調(diào)節(jié)作用，但抗炎作用優(yōu)于地塞米松。
　　 2、烏司他丁對肥大細胞炎癥模型具有抑制脫顆粒、抗氧化應激作用。
　　 3、