印記基因IGF-Ⅱ和生長發(fā)育相關(guān)因子在小于胎齡兒中的變化及意義.pdf

1、第一部分:印記基因IGF-Ⅱ在小于胎齡兒中的表達變化及甲基化調(diào)控
　　目的:低出生體重會增加很多成人疾病患病風(fēng)險。IGF-Ⅱ?qū)μ杭俺錾蟮纳L發(fā)育發(fā)揮著重要的作用。印記基因IGF-Ⅱ，只表達來源于父系的等位基因，與另一印記基因H19交互印記，并共同受甲基化差異性區(qū)域(DMRs)的調(diào)控。本實驗主要研究IGF-Ⅱ在小于胎齡兒(SGA)中的變化及甲基化調(diào)控機制。
　　方法:選取150例新生兒，分為足月適于胎齡兒(AGA)組、足月

2、兒SGA組、足月大于胎齡兒(LGA)組、早產(chǎn)兒AGA組、早產(chǎn)兒SGA組，每組各30例，在生后24-48小時內(nèi)采血，用ELISA方法測定血漿IGF-Ⅱ及受體(IGF2R)、IGF-Ⅰ和IGF結(jié)合蛋白3(IGFBP3)的蛋白水平;用實時熒光定量PCR方法測定IGF-Ⅱ和H19基因mRNA水平;應(yīng)用甲基化特異性PCR(MSP)方法測定兩個重要的甲基化差異性區(qū)域H19 DMR和IGF2 DMR2的甲基化程度。同時據(jù)不同胎齡（≤30周、31-33

3、周、34-36周、37-39周、40-42周）和生后不同日齡(D1、D7、D14、D21和D28)分組，用ELISA方法測定各因子蛋白水平。
　　結(jié)果:生后IGF-Ⅱ的表達水平，足月兒AGA組明顯高于足月兒SGA組（620.42±44.79 vs435.11±33.82，P=0.002）和足月兒LGA組(620.42±44.79 vs483.7±33.80，P=0.018)，但早產(chǎn)兒SGA與早產(chǎn)兒AGA兩組間比較無明顯差異(P=0

4、.182)。IGF-Ⅱ在足月兒SGA組表達水平比早產(chǎn)兒SGA組低（435.11±33.82 vs619.07±44.58，P=0.002），差異有顯著意義。IGF2R、IGF-Ⅰ和IGFBP3在各組間比較均無明顯差異。IGF-ⅡmRNA表達水平在早產(chǎn)兒SGA組和早產(chǎn)兒AGA組(P=0.024)以及足月兒SGA組和早產(chǎn)兒SGA組間(P=0.029)比較都存在顯著差異。H19 DMR和IGF2 DMR2與在其他組織一樣保持著不同的甲基化狀態(tài)

5、。足月兒AGA組中H19 DMR的甲基化程度明顯低于足月兒SGA組(P=0.044)和足月兒LGA組(P=0.027)，而且早產(chǎn)兒SGA組與早產(chǎn)兒AGA組相比，也存在顯著差異(P=0.044)。IGF2 DMR2甲基化水平只在足月兒SGA組和早產(chǎn)兒SGA組間存在差異(P=0.037)。同時發(fā)現(xiàn)IGF-Ⅱ在不同胎齡的新生兒間無明顯差異，但在新生兒不同日齡有明顯變化，IGF-Ⅱ和IGF-Ⅰ都是隨生后日齡的增加而呈現(xiàn)上升趨勢。
　　結(jié)論

6、:IGF-Ⅱ與出生體重有關(guān)，在足月兒SGA中表達水平明顯低于足月兒AGA，IGF-Ⅱ和IGF-Ⅰ在生后隨不同日齡呈逐漸增高趨勢。IGF-Ⅱ在生后早期始終呈現(xiàn)高水平表達，可能生后早期繼續(xù)發(fā)揮重要作用。IGF-Ⅱ表達和H19 DMR的甲基化狀態(tài)有關(guān)，可能后者參與調(diào)控IGF-Ⅱ的表達水平。
　　第二部分:Ghrelin和Obestatin及前體多態(tài)性在小于胎齡兒中的變化
　　目的:胃促生長素(Ghrelin)和肥胖抑制素(Obes

7、tatin)來自同一前體，作用相反，共同參與生長發(fā)育調(diào)節(jié)及維持能量代謝平衡，本實驗主要研究兩者及前體基因多態(tài)性在小于胎齡兒中的變化及意義。
　　方法:選取150例新生兒，分為足月兒AGA組、足月兒SGA組、足月兒LGA組、早產(chǎn)兒AGA組、早產(chǎn)兒SGA組，每組各30例;據(jù)不同胎齡（≤30周、31-33周、34-36周、37-39周、40-42周）和生后不同日齡（D1、D7、D14、D21和D28）分組，相應(yīng)時間點采血后，用ELISA

8、方法測定血漿Ghrelin、Obestatin和瘦素(Leptin)蛋白水平;同時收集2009.01-2010.12月間復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院新生兒科的住院新生兒病例共496例，分為足月兒AGA組、足月兒SGA組;早產(chǎn)兒AGA組、早產(chǎn)兒SGA組，應(yīng)用TaqManTM基因分型技術(shù)測定ghrelin/obestatin三個基因位點多態(tài)性(SNPs，Arg51Gln、Leu72Met和Gln90Leu)，并分別分析它們的基因型及等位基因頻率在S

9、GA和AGA組間的差異。
　　結(jié)果:Ghrelin和Obestatin及Leptin在新生兒期表達水平均較低。Ghrelin表達水平在各組間比較均無明顯差異。Obestatin在足月兒SGA組比足月兒LGA組表達水平高（213.46±15.62 vs166.33±10.02，P=0.014）;在足月兒SGA（37-39周）組表達水平也明顯高于晚期早產(chǎn)兒SGA（34-36周）組(P=0.026)。Ghrelin、Obestatin和

10、Leptin在不同胎齡的適于胎齡兒中沒有明顯差異。在足月兒AGA中，Obestatin和IGF-Ⅱ一樣隨生后日齡的增加而呈逐漸增高趨勢，而Ghrelin/Obestatin比值和Leptin呈下降趨勢。Obestatin在早產(chǎn)兒SGA中D7表達水平高于D1(P=0.008)，而Leptin呈相反變化(P=0.002)。生后第7天Leptin表達水平，足月兒AGA組高于早產(chǎn)兒AGA組(P=0.018);早產(chǎn)兒AGA組高于早產(chǎn)兒SGA組(P

11、=0.014)，組間比較均有明顯差異。ghrelin/obestatin三個SNPs位點檢測，各基因型及等位基因頻率組間比較均無差異。
　　結(jié)論:Ghrelin、Obestatin和Leptin在新生兒期表達水平較低。Obestatin在足月兒SGA與LGA以及晚期早產(chǎn)兒SGA和足月兒SGA間有差異，說明它可能參與調(diào)控小于胎齡兒的生長發(fā)育。新生兒Leptin表達水平高于Ghrelin和Obestatin，但低于IGF-Ⅱ表達水平，