湘西宏成制藥不同基地泡桐的分子鑒定及活性成分的檢測.pdf

1、本研究基于核rRNA基因ITS序列、葉綠體DNA基因間隔序列psbA-trnH和trnL-trnF鑒定湘西宏成制藥公司不同栽培基地的泡桐,通過HPLC法檢測泡桐葉熊果酸和木犀草素的含量及其不同月份中的含量變化,用GC-MS法測定泡桐葉片、復方桐葉燒傷油及其調劑芝麻油的化學成分,為泡桐優(yōu)勢品種的選育和藥物質量的控制提供實驗依據(jù)。
　　用3對特異性引物經(jīng)PCR從泡桐總DNA中分別擴增出600bp的ITS序列、550bp的psbA-tr

2、nH序列和900bp的trnL-trnF序列,用ClustalX7.0軟件和MEGA3.1軟件對DNA序列進行了相似性比較及系統(tǒng)發(fā)育分析。結果顯示已登錄的毛泡桐ITS序列與1號和2號基地泡桐的相似性高于95％,與3號、4號基地和吉首大學校園泡桐的相似性低于80%;毛泡桐trnL-trnF序列與1號和2號基地泡桐的相似性均為99.5%,與3號、4號基地和吉首大學校園泡桐的相似性都低于70%;而4個基地和吉首大學校園泡桐psbA-trnH序

3、列的相似性都高于99%。結果表明,1號和2號基地泡桐可能是毛泡桐,3號、4號基地和吉首大學校園泡桐可能是白花泡桐。
　　通過HPLC法比較湘西宏成制藥公司4個基地和我國部分地區(qū)泡桐葉熊果酸和木犀草素的含量,同時檢測6月至9月4個基地泡桐葉熊果酸和木犀草素含量的變化。所采用的色譜柱為Shim-Pack C18(4.6mm×150mm,5μm),測定熊果酸的流動相為甲醇-0.5%乙酸溶液(85:15),流速為1.0mL/min,檢測波

4、長210nm;測定木犀草素的流動相為甲醇-水-乙酸(60:39:1),流速為1.0mL/min,檢測波長350nm。結果表明,4號基地泡桐葉熊果酸和木犀草素的含量顯著高于其他3個基地的泡桐,而且7月份的泡桐葉熊果酸和木犀草素的含量最高。
　　用乙醇、氯仿和正已烷等不同有機溶劑對泡桐葉、復方桐葉燒傷油及其溶劑芝麻油進行提取,用GC-MS法測定提取物的化學成分。結果表明,復方桐葉燒傷油的主要化學組分來自于生產(chǎn)原料泡桐葉和芝麻油且生產(chǎn)過