冬蟲夏草及蟲草制品中活性成分檢測方法的建立及含量測定.pdf

1、蟲草(Cordyceps)是一類具有很高的藥用價值且資源稀缺的食藥用真菌,其在我國主要分布于高寒草甸地區(qū),如西藏、云南等地區(qū)。因其在抗癌、抗病毒等方面具有良好功效,被廣泛加工制成相關營養(yǎng)、滋補、保健品,常見的類型有制劑、片劑等。由于其生長環(huán)境條件嚴苛,且人工無法栽培天然冬蟲夏草,使得其市場售價居高不下,從而導致市場出現(xiàn)假冬蟲夏草或以別的物質冒充蟲草制品,欺騙消費者使其權益受到侵害。本研究通過考察比較4種蟲草樣品和3種蟲草制品在核苷、蟲草

2、酸、麥角甾醇等營養(yǎng)成分的含量上的差異,希望能夠對今后全面建立蟲草營養(yǎng)價值體系有所幫助,也期待為今后蟲草制品在質量控制、規(guī)范等方面提供依據(jù)。
　　本試驗主要研究內容如下:
　　1、運用高效液相色譜(HPLC)對蟲草及其制品中蟲草素和腺苷的含量進行檢測方法研究并制定了農業(yè)行業(yè)標準。比較提取溶劑、提取方法、提取時間等流動相的不同對蟲草及其制品中蟲草素和腺苷的提取效率的影響,最終確定其提取方法為:固體試樣:稱取粉碎均勻的樣品0.5

3、g于100 mL容量瓶中,加水約80mL,置于超聲波儀中超聲提取3 h,取出后用超純水定容,搖勻。取1 mL樣液離心,將上清液過0.45μm MCM微孔濾膜,濾液供高效液相色譜法分析;液體試樣:準確吸取5 g樣品于50 mL容量瓶中,加水約40 mL,置于超聲波儀中超聲提取30 min,取出用超純水定容搖勻。取樣液過0.45μm MCM微孔濾膜,濾液用高效液相色譜法在流速1 mL/min,柱溫35℃下進行測定。該方法下腺苷和蟲草素均在1

4、-50
　　μg/mL范圍內有良好的線性,且回收率在93.5％-99.7%之間,7家實驗室對本方法的驗證均結果較好,證明了此方法的可行性及可靠性。在此基礎上延展出對5類核苷物質的檢測方法的確定,同時對稍有變動的麥角甾醇測定方法進行驗證。
　　2、采用建立好的方法對3個產地冬蟲夏草和北蟲草及3種制品中5種核苷類物質及麥角甾醇的含量進行測定,還采用現(xiàn)有方法對樣品中蟲草酸、15種水解氨基酸和5種金屬元素的含量進行研究。結果表明:蟲

5、草樣品中只在北蟲草中測出含有蟲草素,其含量為2.404 mg/g,其余三種冬蟲夏草中未檢出含有蟲草素,在蟲草片制品中測得含有蟲草素34.021 mg/g;北蟲草中除蟲草素外另4種核苷類成分的總含量最高,達3.96 mg/g,云南產冬蟲夏草的含量最低為2.24 mg/g。麥角甾醇的含量在北蟲草中含量最高,約為西藏產冬蟲夏草2倍、青海產冬蟲夏草3倍。西藏冬蟲夏草所含蟲草酸最多,達到159.886 mg/g,且4者蟲草酸含量兩兩間均差異極顯著

6、。4種蟲草樣品在氨基酸總含量上均為差異顯著,其中云南冬蟲夏草的氨基酸總量最高,為29.302 g/100g。云南和西藏冬蟲夏草中鎂(Mg)含量差異不顯著,含量為4種蟲草樣品中最高,分別為1.554mg/g和1.544 mg/g,銅(Cu)的含量在青海冬蟲夏草中最高,達到20.127 mg/kg,西藏冬蟲夏草含鐵含量最多,是
　　791.653 mg/kg,而鋅(Zn)和錳(Mn)則在云南冬蟲夏草中含量最大,分別為145.589 m

7、g/kg和64.359 mg/kg。蟲草菌絲體口服液中未測出含有肌苷、腺嘌呤、蟲草素、麥角甾醇、蟲草酸和氨基酸成分。僅在蟲草片制品中測到含有蟲草素,其含量為34.021 mg/g,麥角甾醇在膠囊制品中的含量較蟲草片的含量高,達到1.983 mg/g,且膠囊制品中氨基酸總量約為蟲草片制品氨基酸總量的2倍,達31.164 g/100g,蟲草酸在蟲草片制品中的含量比膠囊制品要高,達162.591 mg/g,在所有測定的成分中,口服液的含量均是

8、最低的。
　　3、按國標對所有樣品中總砷(As)及鉛(Pb)、鎘(Cd)的含量進行測定。實驗結果表明:重金屬鉛和鎘分別在西藏和云南產冬蟲夏草中含量最多,鉛在西藏冬蟲夏草中含量為211.395μg/kg,鎘在云南冬蟲夏草中含量為29.008μg/kg,西藏總砷含量最多為4.864 mg/kg,三種有害金屬的含量均在北蟲草中含量最低。制品中蟲草片的鉛和鎘含量比另外兩種制品的含量要高,分別為13.174μg/kg和18.838μg/kg