冬蟲夏草中活性成分及魚肉中甲基汞的HPLC檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）檢測(cè)技術(shù)以其高效、高速和高靈敏度等特征，成為一種優(yōu)異的分離分析方法，其與各種檢測(cè)器的聯(lián)用已被廣泛應(yīng)用于生物工程、食品工業(yè)、環(huán)境檢測(cè)等領(lǐng)域。本研究分為四個(gè)部分：
　　第一部分：HPLC-PDA法測(cè)定冬蟲夏草中的多糖肽。
　　目的：建立一種直接測(cè)定冬蟲夏草多糖肽的HPLC-PDA法。
　　方法：采用HPLC-PDA和水提醇

2、沉法，以Atlantis T3柱（4.6×250mm，5μm）為色譜柱，柱溫35℃，流動(dòng)相為體積分?jǐn)?shù)為5％的甲醇水溶液，流速為1.0mL/min，進(jìn)樣量為10μL，掃描波長(zhǎng)為190nm—460nm。
　　結(jié)果：平均回收率為96.4%，RSD為0.78%，測(cè)得樣品中多糖肽含量為16.8 mg/g。
　　結(jié)論：該方法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確，回收率較高，為測(cè)定冬蟲夏草保健品中多糖肽提供了可靠方法。
　　第二部分：HPLC-PDA法

3、同時(shí)測(cè)定冬蟲夏草中腺苷和蟲草素。
　　目的：建立一種同時(shí)測(cè)定冬蟲夏草中腺苷、蟲草素含量的HPLC-PDA法。
　　方法：用HPLC-PDA法檢測(cè)，腺苷和蟲草素用流動(dòng)相超聲提取，以UltimateTM AQ-C18柱(4.6×250mm,5?m)為色譜柱，柱溫30℃，流動(dòng)相為甲醇:0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液=10:90(V/V)，流速為1.0ml/min，進(jìn)樣量為20μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為260nm。
　　結(jié)果：腺苷、

4、蟲草素線性范圍為1.0~100.0μg/mL，平均回收率分別為99.4%（RSD為0.48%）、97.8%（RSD為3.85%），測(cè)得樣品中腺苷、蟲草素含量分別為2.236mg/g、0.101mg/g。
　　結(jié)論：流動(dòng)相配比簡(jiǎn)單，回收率高，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)冬蟲夏草及其保健品中腺苷和蟲草素兩種主要核苷類活性成分的同時(shí)快速準(zhǔn)確測(cè)定。
　　第三部分：HPLC-ESI-MS法同時(shí)測(cè)定冬蟲夏草中腺苷、蟲草素和蟲草酸。
　　目的：建立一

5、種同時(shí)測(cè)定冬蟲夏草中的腺苷、蟲草素和蟲草酸的HPLC-ESI-MS法。
　　方法：采用HPLC-MS聯(lián)用法、選擇性離子檢測(cè)(SIM)和電噴霧離子化(ESI)，腺苷、蟲草素和蟲草酸用純水超聲提取，Thermo BioBasic-18 PIONEER(150 mm×2.1 mm，5μm)為色譜柱，柱溫為30℃，流動(dòng)相為0.05 mol/L甲酸-甲醇(94:6)(V/V)，流速為0.2mL/min，進(jìn)樣量為5μL。
　　結(jié)果：腺苷

6、、蟲草素和蟲草酸的線性范圍分別是10～50μg/mL、10～50μg/mL、100～500μg/mL，平均回收率分別為96.56%（RSD為2.75%）、96.27%（RSD為2.60%），97.45%（RSD為2.34%），檢測(cè)限分別為0.16μg/mL、0.23μg/mL、7.3μg/mL，測(cè)得樣品中腺苷、蟲草素和蟲草酸的平均含量為0.74mg/g、0.22mg/g、5.1mg/g。
　　結(jié)論：該方法簡(jiǎn)單而快速，可用于蟲草保健

7、品的質(zhì)量控制和混偽品的便捷鑒別。
　　第四部分：HPLC-AFS法測(cè)定魚肉中甲基汞。
　　目的：建立測(cè)定魚肉中甲基汞(MeHg）含量的高效液相色譜-原子熒光光譜聯(lián)用法（HPLC-AFS）。
　　方法：采用HPLC-AFS檢測(cè)，色譜柱為C18反相色譜柱（150×4.6 mm，5μm），柱溫30℃，流動(dòng)相為乙腈（5.0%，V/V）+乙酸銨（0.462%，m/V）+半胱氨酸(0.12%，m/V)，流速為1.0mL/min，進(jìn)