人FOXA1蛋白的表達、純化及蛋白互作分析.pdf

1、叉頭框（Forkheadbox’ FOX)轉錄因子家族基因廣泛地分布于從酵母到人的各種真核生物中，構成一個龐大的轉錄因子家族，其中在哺乳動物中就擁有40個以上成員，分別參與細胞分化、增殖、代謝及細胞凋亡等生理過程的調節(jié)。FOX家族蛋白有19個亞族，共同特點是含有進化保守的、約100個氨基酸組成的叉狀(Forkhead) DNA結合域（DNA-binding domain，DBD)。目前，有關 FOX家族蛋白的功能及分子機制已逐步成為免疫

2、學遺傳學醫(yī)學以及腫瘤學領域的研宄熱點。
　　轉錄因子FOXA1屬于FOX家族的FOXA亞家族，是 FOX家族最早被克隆的成員。人的FOXA1基因含有472個氨基酸。它的功能區(qū)域分為轉錄激活區(qū)和DNA結合區(qū)。它的DNA結合域通過結合DNA，激活或抑制目的基因的轉錄活性，同時還能參與細胞信號轉導細胞周期調控和新陳代謝的調節(jié)，在生物體發(fā)育及成熟的組織器官中均能發(fā)揮重要作用。FOXA1蛋白還可以和許多其它的蛋白發(fā)生相互作用。
　　為

3、確定轉錄因子FOXA1的互作蛋白，我們構建了FOXA1的原核表達載體，誘導表達并純化后獲得了人FOXA1的C端和N端蛋白片段，為尋找FOXA1的互作蛋白提供材料基礎。本研宄中，我們提取人乳腺癌細胞MCF7的總RNA，逆轉錄成cDNA，設計引物PCR克隆FOXA1的cDNA,再以此為模板擴增FOXA1的C端、N端cDNA片段，分別并克隆進帶有GST標簽的原核表達載體pGEX-4T-l,構建重組表達質粒。雙酶切及測序鑒定正確后，轉化至大腸桿