合江縣斯氏肺吸蟲病流行病學調(diào)查，JAK-STAT和NF-Kβ在此病實驗動物肺、肝、腦中的表達與病理觀察.pdf

1、目的:了解合江縣及毗鄰地區(qū)肺吸蟲病流行現(xiàn)狀；觀察斯氏肺吸蟲病實驗動物模型肺、肝、腦組織超微病理結(jié)構(gòu),觀察JAK—STAT、NF—Kβ通路表達。方法:溪蟹分部位解剖并計算囊蚴感染率(度),問卷調(diào)查,肺吸蟲病金標滲濾試劑盒(DIGFA—Kit)檢測血清抗體,抗體陽性者做肝功檢查；自流行區(qū)采集溪蟹,分離斯氏肺吸蟲囊蚴,經(jīng)腹腔注射感染犬,3月后剖殺,取肺、肝組織并檢獲成蟲備用,肺吸蟲成蟲制備抗原,用腦立體定位儀微量注射肺吸蟲抗原至大鼠大腦皮質(zhì)建

2、立大腦損傷模型,對照組注射生理鹽水,24h后解剖大鼠取腦組織；固定、切片。光鏡下觀察蟲體周圍和抗原注射周圍的組織細胞反應,電鏡下觀察超微病理結(jié)構(gòu)改變,免疫組織化學方法觀察JAK—STAT和NF—Kβ信號通路的表達活性。結(jié)果:(1)第二中間宿主以鋸齒華溪蟹為主,川南流行區(qū)溪蟹的肺吸蟲囊蚴攜帶率為92.37％(2453/2656),蟲種鑒定為斯氏肺吸蟲(Pagumogonimus Skr jabi-ni),流行區(qū)居民食生蟹率21.53％(2

3、08/966),皮下游走性包塊者4.51％(43/966),流行區(qū)人群血清學 DIGFA—Kit檢測肺吸蟲抗體陽性率為4.84％(24/496),川南流行區(qū)人群有生食和半生食溪蟹的習慣,且感染與鎮(zhèn)村、職業(yè)、年齡有關,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),血清肺吸蟲抗體陽性者肝功結(jié)果顯示 Y球蛋白升高,白球蛋白比例倒置；(2)斯氏肺吸蟲病肺、肝、腦組織損害的動物模型建立,感染犬肺和肝表面有突起結(jié)節(jié),質(zhì)稍硬,有纖維疤痕形成。HE顯示感染犬支氣管

4、腔有壞死細胞碎屑或蟲卵,肺泡有蟲卵沉積,卵周有淋巴細胞浸潤,肺泡囊有陷塌,肺泡隔破壞；感染犬肝切片見壞死灶,嗜酸性粒細胞浸潤及嗜酸性膿腫形成,壞死周圍有肉芽腫及纖維組織包裹,肝細胞氣球樣變,萎縮、變性、壞死,肝竇擴張；抗原注射大鼠腦血腫周圍組織水腫明顯,且局灶狀壞死,神經(jīng)元皺縮,尼氏小體溶解,周圍出現(xiàn)間隙,神經(jīng)突呈淺淡或消失,可見單核細胞及膠質(zhì)細胞反應。電鏡顯示感染犬肺可見Ⅰ、Ⅱ型上皮細胞腫脹、剝脫,細胞核破壞,線粒體腫脹、嵴斷裂,內(nèi)質(zhì)

5、網(wǎng)擴張、空泡樣變；大量滲出液,嗜酸性粒細胞,單核細胞浸潤；肺泡隔破壞,細胞水腫破壞。感染犬肝細胞水腫,細胞器破壞,線粒體腫脹、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張,肝血竇紅細胞破壞,內(nèi)皮細胞水腫?？乖⑸浣M大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元胞體腫脹,核移位且形狀不規(guī)則,核膜凸凹不平,核質(zhì)溢出；染色質(zhì)為絮狀；線粒體腫脹,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張呈囊泡化；脂褐素較多。(3)免疫組化顯示正常犬肺中STAT和 NF—Kβ弱陽性表達；感染犬肺可見 STAT和 NF—Kβ陽性細胞,免疫陽性物質(zhì)呈棕褐

6、色,NF—Kβ在肺氣道表達多,STAT在肺實質(zhì)表達多,組間存在顯著性差異(X2=476,X2=521,P<0.05)。正常犬肝中 STAT和NF—Kβ弱陽性表達:感染犬實驗組肝可見STAT和NF—Kβ陽性細胞,以肝細胞壞死區(qū)明顯,胞質(zhì)和胞核中可見陽性表達,組間存在顯著性差異(X2=405,X2=434,P<0.05)。正常對照組大鼠腦中STAT和NF—Kβ弱陽性表達:抗原注射組大鼠腦中可見STAT和NF—Kβ陽性細胞,以大腦皮質(zhì)損傷區(qū)明

7、顯,胞質(zhì)和胞核中見陽性表達,組間存在顯著性差異(X2=476,X2=447,P<0.05)。結(jié)論:(1)肺吸蟲在肺、肝、腦組織中機械破壞作用和炎癥病理反應激活了JAK—STAT、NF—Kβ信號通路的表達。(2)肺吸蟲病引起組織超微結(jié)構(gòu)改變:細胞腫脹,線粒體腫脹,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張。(2)川南流行區(qū)肺吸蟲病的隱性感染依然存在；肺吸蟲病對當?shù)鼐用裼绕涫侵行W生存在著很大的危害:應加強肺吸蟲病防治知識的宣傳和教育,制定相應的防制措施,阻斷該病在川南地