正天丸對藥物代謝酶活性的影響.pdf

1、目的:
　　通過觀察正天丸對戊巴比妥鈉及巴比妥鈉催眠作用的影響，了解正天丸對肝微粒體細胞色素P450活性有無抑制作用。進一步通過體外孵育反應(yīng)，研究正天丸對大鼠肝微粒體細胞色素P4503A4(CYP3A4)活性的影響，并計算IC50，結(jié)合體外實驗，研究正天丸對卡馬西平在大鼠體內(nèi)藥動學(xué)參數(shù)的影響。在以上實驗結(jié)果的基礎(chǔ)上，測定正天丸中總香豆素類成分的含量。為臨床藥物相互作用、不良反應(yīng)防治等提供理論依據(jù)和實驗資料，降低毒副作用和治療成本，

2、保證臨床合理用藥。
　　方法:
　　1.將60只小鼠隨機分為四組:溶媒對照組(2％吐溫-80，20mL·kg-1)、陽性氯霉素組(25mg·kg-1)及正天丸低、高劑量(3，6 g·kg-1)組，每組15只，連續(xù)等容灌胃3天，末次給藥1h后，再給小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉40mg·kg-1或巴比妥鈉180mg·kg-1，觀察小鼠的睡眠潛伏期和睡眠時間。
　　2.制備大鼠肝微粒體，建立體外孵育反應(yīng)體系，以咪達唑侖(Midaz

3、olam，MDZ)為探針藥，測定其代謝產(chǎn)物1'-羥基咪達唑侖(1'-OH-MDZ)的濃度。孵化反應(yīng)分對照組、六種濃度的試藥組和陽性氯霉素組，對照組為探針藥反應(yīng)，試藥組則是正天丸醇提組分設(shè)六個濃度，分別為0.625、1.25、2.5、5、10和20mg·L-1。各管加入CYP3A4的探針藥咪達唑侖后進行孵育反應(yīng)20min，冰浴中冷卻終止反應(yīng)。用反相高效液相色譜法(RP-HPLC)測定體外孵育反應(yīng)體系中探針藥代謝物1'-羥基咪達唑侖的終濃度

4、。根據(jù)各個濃度的抑制率，求出半數(shù)抑制率(IC50)，判斷正天丸醇提組分對大鼠肝微粒體CYP3A4活性的抑制作用強弱。
　　3.取健康健Wistar大鼠12只，按體重隨機分為2組。給藥組給予4g·kg-1正天丸混懸液灌胃，每日1次，連續(xù)5日;對照組給予等容量生理鹽水。末次灌胃1h后，各組大鼠均給予50mg·kg-1卡馬西平灌胃，于卡馬西平灌胃后0.25、0.5、1、1.5、2、3、5、7、10、15和24h時尾靜脈取血0.5ml，離

5、心出血漿，用高效液相色譜法測定各組血樣中卡馬西平的藥-時血藥濃度，并計算大鼠體內(nèi)卡馬西平的藥動力學(xué)參數(shù)。
　　4.選用5個批次的正天丸，提取正天丸中的總香豆素，以歐前胡素為對照品，采用紫外分光光度法，檢測波長為300nm，測定正天丸中的總香豆素含量。
　　結(jié)果:
　　1.氯霉素組和低、高劑量的正天丸組使戊巴比妥鈉對小鼠的催眠時間分別延長222.2％、123.1％、42.6％，其中氯霉素組和低劑量的正天丸組與溶媒對照組比

6、較，小鼠的催眠時間顯著延長(P＜0.01);正天丸高劑量組對戊巴比妥鈉的催眠時間影響小于低劑量組，高劑量組與溶媒對照組的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。氯霉素組和低劑量正天丸組對巴比妥鈉催眠潛伏期和催眠時間的影響與溶媒對照組比較均無顯著性差異;高劑量正天丸組能顯著延長巴比妥鈉催眠潛伏期(P＜0.01），并縮短催眠時間(P＜0.01)。
　　2.空白對照組中探針藥咪達唑侖的代謝物1'-羥基咪達唑侖的終濃度為2.62μmol·L-1

7、。六個濃度的陽性對照藥氯霉素均強烈抑制了1'-羥基咪達唑侖的生成率，且呈劑量依賴性抑制(P＜0.01）。六個濃度的正天丸醇提組分對大鼠肝微粒體CYP3A4活性呈現(xiàn)出不同程度抑制作用，且亦呈劑量依賴性抑制(P＜0.01)。正天丸醇提組分對CYP3A4活性的IC50值為8.99 mg·L-1。
　　3.兩組卡馬西平主要藥動學(xué)參數(shù):給藥組達峰時間Tmax(3.756±1.460)、峰濃度Cmax(13.633±4.20)、藥-時曲線下面

8、積AUC(183.918±59.640)、消除半衰期T1/2ke(7.362±2.521)、消除速度常數(shù)Ke(0.833±0.850)、體內(nèi)總清除率CL(0.3435±0.144)，表觀分布容積V(3.774±2.095);對照組Tmax(2.057±1.795)，Cmax(10.250±7.994)、AUC(162.788±18.247)、T1/2ke(5.710±2.677)、Ke(9.352±14.906)、CL(0.6735±0

9、.584)、V(4.885±4.736)。用正天丸處理的給藥組大鼠與對照組大鼠相比較，卡馬西平的消除速率常數(shù)(Ke）和體內(nèi)總清除率(CL)明顯降低，消除半衰期(T1/2 ke)延長，曲線下面積(AUC)增加，峰濃度(Cmax)明顯升高，均P＜0.05。
　　4.不同批次的正天丸中總香豆素百分含量依次為1.262±0.033，1.104±0.032，1.288±0.024,1.464±0.036,1.476±0.056。