動(dòng)、靜脈移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療急性期腦梗死模型的比較.pdf

1、目的：
　　探討大鼠缺血再灌注（ischemia-reperfusion）6小時(shí)分別經(jīng)動(dòng)、靜脈途徑移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow derived mesenchymal stem cells，BMSCs）后，對(duì)血清腫瘤壞死因子（TNF-α）水平；缺血半暗帶處星形膠質(zhì)細(xì)胞（GFAP）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、B淋巴細(xì)胞瘤-2基因蛋白（Bcl-2）、bcl-2相關(guān)x蛋白（Bax）、凋亡細(xì)胞數(shù)、神經(jīng)功能缺損評(píng)分（mN

2、SS）和體重計(jì)數(shù)的影響以及干細(xì)胞在器官分布有無(wú)差異，初步探討B(tài)MSCs治療急性腦梗死的具體機(jī)制和比較動(dòng)、靜脈移植途徑差異。
　　方法：
　　1、采用改良線栓法栓塞阻隔大鼠大腦中動(dòng)脈供血供氧，制作MCAO模型。
　　2、采用全骨髓貼壁分離法提取、提純和擴(kuò)增培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)鑒定細(xì)胞表面抗原，氯甲基苯甲酰胺（CM-dil）染色標(biāo)記BMSCs以示蹤。
　　3、MCAO6小時(shí)后分別經(jīng)頸動(dòng)脈、尾靜脈途徑移

3、植等劑量的BMSCs和被標(biāo)記的BMSCs。
　　4、移植后第7天觀察記錄神經(jīng)功能缺損評(píng)分和體重計(jì)數(shù)。
　　5、酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定血清TNF-α水平。
　　6、免疫組化測(cè)定GFAP、VEGF、Bcl-2和Ba x表達(dá)。
　　7、原位末端標(biāo)記法測(cè)定缺血半暗帶處凋亡細(xì)胞數(shù)。
　　8、熒光觀察BMSCs在腦組織、肺臟、脾臟、肝臟、腎臟和心臟的分布差異。
　　結(jié)果：
　　1、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面抗原結(jié)果

4、示：CD90表達(dá)率為95.7％、CD29表達(dá)率為97.3%、CD106表達(dá)率為52.7%、CD11b表達(dá)率為6.01%、CD34表達(dá)率為2.95%、CD45表達(dá)率為2.26%。
　　2、頸動(dòng)脈BMSCs組mNSS評(píng)分顯著小于頸動(dòng)脈PBS組，尾靜脈BMSCs組mNSS評(píng)分顯著小于尾靜脈PBS組，頸動(dòng)脈BMSCs和尾靜脈BMSCs組相比較mNSS評(píng)分無(wú)差異；頸動(dòng)脈BMSCs體重計(jì)數(shù)顯著大于頸動(dòng)脈PBS組，尾靜脈BMSCs組體重計(jì)數(shù)顯著

5、大于尾靜脈PBS組，頸動(dòng)脈BMSCs和尾靜脈PBS組體重計(jì)數(shù)比較無(wú)差異。
　　3、GFAP陽(yáng)性細(xì)胞主要集中在梗死中心周邊缺血半暗帶處，移植組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著大于PBS組，頸動(dòng)脈BMSCs組和尾靜脈BMSCs組相比較無(wú)差異。VEGF陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在缺血半暗帶處強(qiáng)表達(dá)，尾靜脈BMSCs組陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)于尾靜脈PBS組，頸動(dòng)脈BMSCs和頸動(dòng)脈PBS組陽(yáng)性表達(dá)無(wú)差異，但頸動(dòng)脈BMSCs組有增高趨勢(shì)，頸動(dòng)脈BMSCs組和尾靜脈BMSCs組陽(yáng)性表達(dá)無(wú)

6、差異。
　　4、VEGF在尾靜脈BMSCs組顯著大于尾靜脈PBS組，頸動(dòng)脈BMSCs組和頸動(dòng)脈PBS組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但頸動(dòng)脈BMSCs組有增高趨勢(shì)，頸動(dòng)脈BMSCs組和尾靜脈BMSCs組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　5、Bc l-2陽(yáng)性細(xì)胞普遍見于梗死側(cè)和健側(cè)大腦半球，腦梗死缺血半暗帶處陽(yáng)性表達(dá)最為強(qiáng)烈。暫且不論移植途徑差異，BMSCs組陽(yáng)性細(xì)胞累積光密度值顯著多于PBS組。頸動(dòng)脈BMSCs組和尾靜脈BMSCs組陽(yáng)性細(xì)胞累積光密度值無(wú)

7、差異。Bax陽(yáng)性細(xì)胞主要集中表達(dá)于缺血半暗帶處，頸動(dòng)脈BMSCs組、尾靜脈BMSCs組、頸動(dòng)脈PBS組和尾靜脈PBS組陽(yáng)性細(xì)胞累積光密度值比較無(wú)差異。
　　6、頸動(dòng)脈BMSCs組血清TNF-α濃度值顯著低于頸動(dòng)脈PBS組，尾靜脈BMSCs組顯著低于尾靜脈PBS組，頸動(dòng)脈BMSCs組和尾靜脈BMSCs組血清TNF-濃度值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，頸動(dòng)脈PBS組較尾靜脈PBS組血清TNF-α濃度值有增高趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　7、凋亡細(xì)

8、胞主要出現(xiàn)在缺血半暗帶處，健側(cè)未見陽(yáng)性細(xì)胞。BMSCs組凋亡細(xì)胞數(shù)顯著小于PBS組，頸動(dòng)脈BMSCs組和尾靜脈BMSCs組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)無(wú)差異。
　　8、示蹤標(biāo)記的BMSCs主要集中于肺臟和脾臟，梗死周圍組織可見干細(xì)胞分布，健側(cè)未見；肝臟和腎臟干細(xì)胞分布較少，心臟未見干細(xì)胞熒光信號(hào)，頸動(dòng)脈BMSCs組和尾靜脈BMSCs組中同一器官干細(xì)胞分布數(shù)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　BMSCs可通過(guò)增強(qiáng)GFAP、VEGF的表達(dá)，維