酪氨酸激酶抑制劑BIBF1120逆轉(zhuǎn)P-gp介導(dǎo)肝癌HepG2-adr細(xì)胞株多藥耐藥的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、[目的]
　　 多藥耐藥是阻礙肝癌化療效果的主要屏障，其產(chǎn)生的重要原因是腫瘤細(xì)胞P-gp高表達(dá)。本研究檢測了多靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑BIBF1120逆轉(zhuǎn)P-gp介導(dǎo)的多藥耐藥并對其機(jī)理進(jìn)行探討。
　　 [方法]
　　 以人肝癌細(xì)胞株HepG2和它的P-gp高表達(dá)多藥耐藥細(xì)胞株HepG2/adr為模型；MTT法檢測細(xì)胞毒效應(yīng)；阿霉素，羅丹明123積累以流式細(xì)胞儀測定：蛋白表達(dá)測定用Western blotting；P

2、-gp在mRNA表達(dá)水平用RT-PCR法測定；化學(xué)發(fā)光法測定BIBF1120對P-gp ATPase活性的影響。
　　 [結(jié)果]
　　 BIBF1120可濃度依賴性增加HepG2/adr細(xì)胞株對阿霉素和紫杉醇的敏感性，0.75，1.5和3μmol/L的BIBF1120可以使HepG2/adr細(xì)胞株對阿霉素的敏感性分別增加2.18、3.87和7.32倍，對紫杉醇的敏感性分別增加2.56、4.46和7.89倍。而對相應(yīng)敏感細(xì)

3、胞株HepG2則無影響，也不改變非P-gp底物順鉑的細(xì)胞毒作用。0.75，1.5和3μmol/L的BIBF1120使阿霉素的熒光值在HepG2/adr細(xì)胞中分別增加了1.21、1.63和1.98倍，羅丹明123的熒光值分別增加了3.12、4.23和5.78倍，而阿霉素和羅丹明在相應(yīng)敏感細(xì)胞HepG2中的積累未受影響。說明BIBF1120可影響藥物外排泵功能恢復(fù)P-gp介導(dǎo)的肝癌MDR細(xì)胞對傳統(tǒng)化療藥物的敏感性。
　　 BIBF1

4、120對下游ERK和AKT磷酸化水平的抑制常作為評價(jià)BIBF1120藥效的指標(biāo)。我們的結(jié)果表明在HepG2和HepG2/adr細(xì)胞中BIBF1120在有效逆轉(zhuǎn)濃度下對Akt和Erk1/2的磷酸化水平?jīng)]有明顯阻斷作用，表明BIBF1120恢復(fù)P-gp高表達(dá)肝癌MDR細(xì)胞對化療藥物的敏感性不依賴于BIBF1120對ERK和AKT磷酸化的阻斷作用。
　　 Western blot和RT-PCR結(jié)果表明逆轉(zhuǎn)濃度的BIBF1120不影響P