酪氨酸激酶抑制劑聯(lián)合漢防己甲素逆轉(zhuǎn)K562-A02細胞多藥耐藥作用機制的研究.pdf

1、目的：本研究旨在探討伊馬替尼(imatinib)、尼洛替尼(nilotinib)聯(lián)合漢防己甲素(tetrandrine,Tet)逆轉(zhuǎn)K562／A02細胞耐藥與誘導(dǎo)凋亡的相關(guān)性及其機制,為白血病的治療提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　 方法：應(yīng)用MTT法選擇伊馬替尼、尼洛替尼和漢防己甲素的逆轉(zhuǎn)濃度,并且計算伊馬替尼、尼洛替尼和漢防己甲素干預(yù)K562／A02細胞后的柔紅霉素(daunombicin,DNR)的半數(shù)抑制濃度(IC50):應(yīng)用流

2、式細胞術(shù)(flow cytometery,FCM)檢測K562／A02細胞凋亡率；應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse transcript polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測bax和survivin mRNA的表達及Western blotting分析Bax和Survivin蛋白的表達情況。
　　 結(jié)果：1、0.06251μmol／L伊馬替尼、5nmol／L尼洛替尼和1.0μmol／L漢防

3、己甲素單獨作用于K562／A02細胞48小時后,DNR對K562／A02細胞的IC50分別為(6.81±0.15)mg／L、(5.714-0.72)mg／L和(6.52±O.43)mg／L,逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為2.10±0.07、2.50±0.13和2.19±0.09。而伊馬替尼和尼洛替尼分別聯(lián)合漢防己甲素處理細胞48小時后,DNR對K562／A02細胞的IC50降為(2.91±0.23)mg／L和(3.12±0.13)mg／L,逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別

4、為4.93±0.11和4.58±0.17,與單藥組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 2、0.0625μmol／L伊馬替尼、5nmol／L尼洛替尼和1.0μmol／L漢防己甲素單獨作用于K562／A02細胞48小時后,均能增加DNR誘導(dǎo)K562／A02細胞凋亡,伊馬替尼、尼洛替尼分別和漢防己甲素聯(lián)合作用時細胞凋亡率較單藥組增高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),并且伊馬替尼和漢防己甲素聯(lián)合組細胞凋亡率高于尼洛替尼和漢防

5、己甲素聯(lián)合組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 3、(1)單用0.0625μmol／L伊馬替尼、5nmol／L尼洛替尼和1.0μmol／L漢防己甲素48小時后,K562／A02細胞中bax mRNA灰度值分別為0.33±0.01、0.39±0.02、0.48±0.04,當伊馬替尼、尼洛替尼分別和漢防己甲素聯(lián)合作用時K562／A02細胞中bax mRNA灰度值分別為0.91±0.04和0.78±0.05,與單藥組相比差異有

6、統(tǒng)計學意義(P<0.05),且尼洛替尼聯(lián)合漢防己甲素組與伊馬替尼聯(lián)合漢防己甲素組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。單用0.0625μmol／L伊馬替尼、5nmol／L尼洛替尼和1.0μmol／L漢防己甲素48小時后,K562／A02細胞中Bax蛋白表達水平分別為0.61±0.01、0.83±0.02和1.02±0.02,伊馬替尼、尼洛替尼分別和漢防己甲素聯(lián)合作用時K562／A02細胞中Bax蛋白表達水平分別為2.04±0.05和1

7、.72±0.04,與單藥組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),且尼洛替尼聯(lián)合漢防己甲素組與伊馬替尼聯(lián)合漢防己甲素組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(2)單用0.0625μmol／L伊馬替尼、5nmol／L尼洛替尼和1.0μmol／L漢防己甲素48小時后,K562／A02細胞中survivin mRNA灰度值分別為0.68±0.03、0.59±0.02和0.51±0.01,當伊馬替尼、尼洛替尼分別和漢防己甲素聯(lián)合作用時K562／

8、A02細胞中survivin mRNA灰度值分別為0.23±0.01和0.32±0.02,與單藥組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),且尼洛替尼聯(lián)合漢防己甲素組與伊馬替尼聯(lián)合漢防己甲素組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。單用0.0625μmol／L伊馬替尼、5nmol／L尼洛替尼和1.0μmol／L Tet48小時后,K562／A02細胞中Survivin蛋白表達水平分別為0.79±0.06、0.70±0.04和0.58±0.0

9、2,當伊馬替尼、尼洛替尼分別和漢防己甲素聯(lián)合作用時K562／A02細胞中Survivin蛋白表達水平分別為0.24±0.01和0.38±0.01,與單藥組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),且尼洛替尼聯(lián)合漢防己甲素組與伊馬替尼聯(lián)合漢防己甲素組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：1、K562／A02細胞對DNR耐藥,單獨應(yīng)用伊馬替尼、尼洛替尼和漢防己甲素均可部分逆轉(zhuǎn)K562／A02細胞對DNR的耐藥,并可增加D