應用磁性納米Fe-,3-O-,4-顆粒和漢防己甲素協(xié)同逆轉(zhuǎn)K562-A02細胞對阿霉素耐藥性的研究.pdf

1、研究目的：本課題旨在建立一種功能化磁性納米四氧化三鐵顆粒(Fe<,3>O<,4>-MNPs)攜載阿霉素(ADM)以及Fe<,3>O<,4>-MNPs共聚合ADM和漢防己甲素(Tet)的藥物制備方法，考察聚合溫度、聚合時間、藥球比對載藥的影響；研究攜載ADM的Fe<,3>O<,4>-MNPs(Fe<,3>O<,4>-MNPs-ADM)以及共聚合ADM和Tet的Fe<,3>O<,4>-NPs(Fe<,3>O<,4>-MNPs-ADM-Tet

2、)對人慢性粒細胞白血病急性紅白血病變細胞株K562及其耐藥細胞株K562/A02的作用，在蛋白質(zhì)和基因水平初步探討應用Fe<,3>O<,4>-MNPs和Tet協(xié)同逆轉(zhuǎn)K562/A02細胞對阿霉素耐藥的機理。開發(fā)新型耐藥逆轉(zhuǎn)劑，為臨床治療提供新策略和理論基礎。 研究方法：(1)采用機械吸附聚合法在4℃、37℃下以不同濃度Fe<,3>O<,4>-MNPs(V/V：0.05， 0.1，0.2，0.4)和一定濃度的ADM(50 μmol

3、/l)(不同藥球比)以及不同濃度Fe<,3>O<,4>-MNPs(V/V：0.05， 0.1，0.2，0.4)和一定濃度的ADM(50 μmol/l)、Tet(10 μmol/l) (不同藥球比)分別聚合24h、48h。(2)溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑(MTT)法檢測兩種細胞分別與在不同聚合溫度、聚合時間、藥球比條件下的的聚合物Fe<,3>O<,4>-MNPs-ADM以及Fe<,3>O<,4>-MNPs-A

4、DM-Tet孵育48小時后的生存率，計算細胞抑制率。(3)熒光顯微鏡檢測各實驗組K562/A02細胞內(nèi)ADM濃度。 (4)應用流式細胞儀測定各實驗組K562/A02細胞細胞膜上P-gp數(shù)量的表達。(5)采用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應法檢測各實驗組K562/A02細胞細胞多藥耐藥基因(mdrl基因)mRNA表達水平。 結(jié)果：(1)隨著Fe<,3>O<,4>-MNPs濃度增加，F(xiàn)e<,3>O<,4>-MNPs-ADM以及Fe<,3>O

5、<,4>-MNPs-ADM-Tet對兩種細胞K562和K562/A02的細胞抑制率均提高，聚合在4℃、48h時的細胞抑制率分別高于37℃、24h。①對于K562細胞：隨著Fe<,3>O<,4>-MNPs濃度的增加，F(xiàn)e<,3>O<,4>-MNPs-ADM以及Fe<,3>O<,4>-MNPs-ADM-Tet對K562細胞抑制率均逐漸增強，呈直線相關；聚合條件在4℃，24h的細胞抑制率強于37℃，24h的細胞抑制率。②對于K562/A02細

6、胞：隨著Fe<,3>O<,4>-MNPs濃度的增加，細胞抑制率增強但不呈直線相關；聚合條件在37℃，48h的細胞抑制率強于37℃，24h的細胞抑制率；在37℃，24h聚合條件下通過熒光顯微鏡所測得的細胞內(nèi)ADM熒光強度值增強，不呈直線相關。(2)隨著Fe<,3>O<,4>-MNPs濃度增加，F(xiàn)e<,3>O<,4>-MNPs攜載ADM以及Fe<,3>O<,4>-MNPs共聚合ADM和Tet與K562/A02的作用后，細胞內(nèi)ADM的熒光強度

7、增加，但其之間不成線性關系與MTT法所反映的細胞存活率的變化一致。(3)Tet能夠降低K562/A02細胞膜P-gp表達，下調(diào)mdrl mRNA水平。(4)攜載Tet的Fe<,3>O<,4>-MNPs能夠增強這種基因的下調(diào)，具有協(xié)同作用。但是不能降低P-gp表達的數(shù)量。結(jié)論：(1)可通過機械吸附法攜載水溶性藥物ADM、共聚合ADM和Tet兩藥，聚合過程具有顯著的溫度、時間依賴特性。(2)單獨攜載ADM或Tet以及共聚合兩藥的Fe<,3>