CD44與ALDH1真核雙表達質粒構建和體外表達.pdf

1、分類號：R 5 5密 級：學位類別： 科學學位田 專業(yè)學位口◇學校代碼：1006 2學 號：2 0 1 1 6 0 2 6 2 2學科門類：醫(yī)學又坪眚科矢號 T l A 咐I 一麓E D I C A l I U 鞠l V E 鸛1 1 r Y碩士學位論文M A S T E R ’S D I S S E R T A T I o N論文題目：C D 4 4 與A L D H l 真核雙表達質粒構建和體外表達T IT L E C O N S

2、T R U C T I o N O F C O ．E X P R E S S I O NP L A S M I D p B u d C E 4 ．1 - C D 4 4 一A L D H lA N D I T S E X P R E S S I O N I N V I T R o一級學科：臨床醫(yī)學二級學科：內科學血液病學論文作者：呂艷指導教師：龐華教授天津醫(yī)科大學研究生院二。一五年五月天津醫(yī)科大學碩士學位論文中文摘要【目的】本實驗以C

3、D 4 4 及A L D H l 基因及其表達產物為研究對象，構建真核表達重組質粒p B u d C E 4 ．1 ．C D 4 4 ．A L D H 1 、p B u d C E 4 ．1 ．C D 4 4 、p B u d C E 4 ．1 ．A L D H 1 ，并分別轉染M C F ．7 細胞，觀察實驗各組C D 4 4 及A L D H l 基因和蛋白表達情況及活性并進行統(tǒng)計學分析，用于以C D 4 4 及A L D H l

4、為基礎的腫瘤靶向治療研究，為進一步實驗提供理論支持?！緝热荨勘菊n題主要由兩部分組成：本文第一部分通過R T - P C R 方法檢測三種腫瘤細胞系M C F ．7 、P C 3 、A 5 4 2 中C D 4 4 及A L D H l 目的基因的表達情況，依據實驗結果選取合適細胞作為克隆目的基因片段的來源，通過D N A 重組技術構建真核表達重組質粒p B u d C E 4 ．1 一C D 4 4 、p B u d C E 4 ．1

5、．A L D H l 、p B u d C E 4 ．1 ．C D 4 4 ．A L D H l ，并通過P C R 、酶切、基因測序方法驗證重組質粒構建是否成功。本文第二部分通過重組質粒轉染M C F 一7 細胞，并細胞分組A ：空白對照組B ：空質粒組C ：p B u d C E 4 ．1 - C D 4 4 轉染組D ：p B u d C E 4 ．1 一A L D H l 轉染組E ：p B u d C E 4 ．1 ．C D

6、4 4 一A L D H l 轉染組，應用R T - P C R 及W e s t e m b l o t 檢測目的基因C D 4 4 及A L D H I 的體外表達變化：應用C C K ．8 法檢測目的基因C D 4 4與A L D H l 對細胞增殖能力影響，M T T 法檢測其對細胞．基質粘附能力的影響，并應用統(tǒng)計學方法分析?！痉椒ā? ．M C F ．7 、P C 3 、A 5 4 2 三種腫瘤細胞系培養(yǎng)，并應用R T - P

7、 C R 檢測三種細胞系中基因C D 4 4 及A L D H l 的表達情況。2 ．依據上步檢測結果選取M C F ．7 及A 5 4 2 細胞系作為外源基因克隆來源，應用R T - P C R 獲得目的基因：含N o t I ／X h o I 酶切位點C D 4 4 轉錄子4 及含H i n d l I I ／) ( b a I 酶切位點A L D H l 片段。3 ．利用D N A 重組技術構建真核表達重組質粒p B u d C