pcdna3.1stnfrⅰ真核表達載體體外體內(nèi)的表達和pcdna3.1sil1rⅰ體外表達的研究

1、四川大學博士學位論文PcDNA3.1/sTNFR Ⅰ真核表達載體體外體內(nèi)的表達和PcDNA3.1/sIL-1R Ⅰ體外表達的研究姓名：徐琛蓉申請學位級別：博士專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學指導教師：章錦才20030416四川大學博士學位論文隨著T N F —a 濃度的降低中和作用則增強，具有劑量效應(yīng)關(guān)系。證實P c D N A 3 ．1 ／s T N F RI 載體在導入C H O 細胞后能夠進行轉(zhuǎn)錄和翻譯，并被分泌到細胞外，表達的產(chǎn)物具有阻斷T

2、N F ．a(chǎn) 生物學活性的作用。將載體直接注入小鼠小腿的脛前肌，E L I S A 法檢測小腿肌肉勻漿液中的s T N F R I 表達。結(jié)果顯示，注射P c D N A 3 ，1 ／s T N F RI 實驗組在注射后7 天與1 0 天，小腿肌肉勻漿液中s T N F R I 表達的量均顯著高于對照組，注射后第1 0 天s T N F R I 表達量高于第7 天s T N F RI 表達量。這說明采用裸D N A 直接注射法這種方式將

3、重組基因轉(zhuǎn)移入肌肉內(nèi)，可以使目的基因得到一定的表達，但表達的量較低。采用脂質(zhì)體介導法將載體導入C H O 細胞株，檢測篩選出的P c D N A 3 1 ／s I L 一1 RI 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的C H O 細胞其細胞培養(yǎng)上清液能否阻斷I L ．1B ! k - 物學活性。結(jié)果表明，P c D N A 3 ．1 ／s I L 一1 RI 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的C H O 細胞其細胞培養(yǎng)上清液能阻斷不同濃度I L 一1B 抑制A 3 7 5 細胞生長的作用

4、，隨著I L ．1B 濃度的降低中和作用則增強，具有劑量效應(yīng)關(guān)系。提示該重組質(zhì)粒導入C H O 細胞后能夠表達目的產(chǎn)物s l L 一1 R I ，并且表達的產(chǎn)物具有生物學活性。綜上所述，構(gòu)建的P c D N A 3 ．1 ／s T N F RI 和P c D N A 3 ．1 ／s l L ．1 RI 真核表達載體在被導入哺乳動物細胞內(nèi)后，能夠進行轉(zhuǎn)錄和翻譯，并被分泌到細胞外，表達的產(chǎn)物具有相應(yīng)的生物學活性；而且P c D N A 3