pcdna3.1stnfrⅰ真核表達(dá)載體體外體內(nèi)的表達(dá)和pcdna3.1sil1rⅰ體外表達(dá)的研究

1、四川大學(xué)博士學(xué)位論文PcDNA3.1/sTNFR Ⅰ真核表達(dá)載體體外體內(nèi)的表達(dá)和PcDNA3.1/sIL-1R Ⅰ體外表達(dá)的研究姓名：徐琛蓉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：章錦才20030416四川大學(xué)博士學(xué)位論文隨著T N F —a 濃度的降低中和作用則增強(qiáng)，具有劑量效應(yīng)關(guān)系。證實(shí)P c D N A 3 ．1 ／s T N F RI 載體在導(dǎo)入C H O 細(xì)胞后能夠進(jìn)行轉(zhuǎn)錄和翻譯，并被分泌到細(xì)胞外，表達(dá)的產(chǎn)物具有阻斷T

2、N F ．a(chǎn) 生物學(xué)活性的作用。將載體直接注入小鼠小腿的脛前肌，E L I S A 法檢測(cè)小腿肌肉勻漿液中的s T N F R I 表達(dá)。結(jié)果顯示，注射P c D N A 3 ，1 ／s T N F RI 實(shí)驗(yàn)組在注射后7 天與1 0 天，小腿肌肉勻漿液中s T N F R I 表達(dá)的量均顯著高于對(duì)照組，注射后第1 0 天s T N F R I 表達(dá)量高于第7 天s T N F RI 表達(dá)量。這說(shuō)明采用裸D N A 直接注射法這種方式將

3、重組基因轉(zhuǎn)移入肌肉內(nèi)，可以使目的基因得到一定的表達(dá)，但表達(dá)的量較低。采用脂質(zhì)體介導(dǎo)法將載體導(dǎo)入C H O 細(xì)胞株，檢測(cè)篩選出的P c D N A 3 1 ／s I L 一1 RI 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的C H O 細(xì)胞其細(xì)胞培養(yǎng)上清液能否阻斷I L ．1B ! k - 物學(xué)活性。結(jié)果表明，P c D N A 3 ．1 ／s I L 一1 RI 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的C H O 細(xì)胞其細(xì)胞培養(yǎng)上清液能阻斷不同濃度I L 一1B 抑制A 3 7 5 細(xì)胞生長(zhǎng)的作用

4、，隨著I L ．1B 濃度的降低中和作用則增強(qiáng)，具有劑量效應(yīng)關(guān)系。提示該重組質(zhì)粒導(dǎo)入C H O 細(xì)胞后能夠表達(dá)目的產(chǎn)物s l L 一1 R I ，并且表達(dá)的產(chǎn)物具有生物學(xué)活性。綜上所述，構(gòu)建的P c D N A 3 ．1 ／s T N F RI 和P c D N A 3 ．1 ／s l L ．1 RI 真核表達(dá)載體在被導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)后，能夠進(jìn)行轉(zhuǎn)錄和翻譯，并被分泌到細(xì)胞外，表達(dá)的產(chǎn)物具有相應(yīng)的生物學(xué)活性；而且P c D N A 3