cdc25b基因在胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)及真核表達(dá)載體pcdna3.1cdc25b3的構(gòu)建與轉(zhuǎn)染

1、東南大學(xué)碩士學(xué)位論文CDC25B基因在胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)及真核表達(dá)載體pcDNA3.1-CDC25B3的構(gòu)建與轉(zhuǎn)染姓名：孔波申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：石欣20070501東南大學(xué)碩士學(xué)位論文T h e e x p r e s s i o n O f C D C 2 5 B i np a n c r e a t i cc a n c e r c e l ll i n e sa n dc o n s t r u c t i

2、o na n d t r a n s f e c t i o no f r e c o m b i n a n t v e c t o rp c D N A 3 ．1 - C D C 2 5 8 3A b s t r a c tO b j e c t i v e ：T oi n v e s t i g a t et h ee x p r e s s i o n o f e a c hs p i c i n g v a r i a n t

3、o f C D C 2 5 B i nf o u r p a n c r e a t i cc a n c e r c e l l l i n e s a n d c o n s t n L c t r e c o m b i n a n t p l a s m i dp c D N A 3 ．1 - C D C 2 5 B a n dt r a n s f e c t i t f o r t h e f u r t h e rs t

4、u d y r e g a r d i n gt o t h e f u n c t i o n o f C D C 2 5 Bi n t h ed e v e l o p m e n to f p a n c r e a t i c c a n e r ．M e t h o d s ：R T - P C R a n dW e s t e r nb l o ta r ee m p l o y e dt o B s s e s st h

5、ee x p r e s s i o no ft h r e es p i c i n gv a r i a n t s m R N A a n d p r o t e i no fC D C 2 5 Br e s p e c t i v e l y ．T h ee n c o d i n g r e g i o n o fC D C 2 5 B I ，C D C 2 5 8 2 a n dC D C 2 5 8 3 w e r e c

6、 l o n e di n t oe u k a r y o t i c e x p r e s s i o n v e c t o rp c D N A 3 ．1 ( + ) ．A f t e rv e r i f i c a t i o n b yD N A s e q u e n c i n g ，t h e a c q u i r e dr e c o m b i n a n tp l a s m i d p c D N A 3

7、 ．1 - C D C 2 5 8 3 w a st r a n s f e c t e d i n t o p a n c r e a t i c c a n c e r c e l l l i n eS W - 1 9 9 0 v i a l i p o s o m e - m e d i a t e d a p p r o a c h i n w h i c ho n l y l o we x p r e s s i o n o

8、fC D C 2 5 B p r o t e i nC a n b ed e t e c t e d ．S e l e c t e db yG 4 1 8 ，t h e t r a n s f e c t e dS W - 1 9 9 0 W a ss u b j e c t e d t oR T - P C R a n d W e s t e r n b l o ta s s a y ．R e s u l t s ：T h er e

9、s u l t so f R T - P C R s u g g e s t e d t h a t t h ee x p r e s s i o no f C D C 2 5 8 1a n dC D C 2 5 8 2a r ee q u a l l yh i g hi nP a n e - l ；a n dt h ee x p r e s s i o no fC D C 2 5 8 2 i s r e l a t i v e l y

10、 s t r o n gi nC F P A C —la n dS W - 1 9 9 0 ；t h e e x p r e s s i o n o f C D C 2 5 8 1 i ss i g n i f i c a n t i nB x p c - 3 ；w h i l et h ee x p r e s s i o no f C D C 2 5 8 3 i sb a r e l yd e t e c t a b l e i n

11、f o u r c e l ll i n e s ．T h ee x p r e s s i o n o fC D C 2 5 B p r o t e i n w a sf o u n dt o b e h i g h l y e x p r e s s e di nP a n e - l a n d C F P A C - 1b yW e s t e r nb l o t ；m e d i u me x p r e s s i o n

12、o fC D C 2 5 B p r o t e i nw a s f o u n di n S W - 1 9 9 0 ；y e tl e s st on o n ee x p r e s s i o n c o u l db e d e t e c t e d i nB x p c 一3 ．C o n f m n e d b y D N A s e q u e n c i n g ，t h er e c o m b i n a n

13、t v e c t o r sc o n t a i n t h e e n t i r eC D S r e g i o no f C D C 2 5 8 1 ，C D C 2 5 8 2 a n dC D C 2 5 8 3 ．T r a n s f e c t e x i b yr e c o m b i n a n t v e c t o r p c D N A 3 ．1 ·C D C 2 5 8 3 ，S W - 1