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1、中南大學(xué)碩士學(xué)位論文缺氧誘導(dǎo)因子1α基因克隆及HIF-1α-pcDNA3.1表達(dá)研究姓名:劉劍申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):胸心外科指導(dǎo)教師:楊進(jìn)福20070501碩士學(xué)位論文 中文摘要證實。方法:抽提大鼠心肌細(xì)胞m R N A ,以m R N A 為模版,逆轉(zhuǎn)錄得到c D N A ,P C R 擴(kuò)增H I F .1 a 目的基因,連接到p G E M .T 載體中,酶切,測序證實,雙酶切將H I F —l a 轉(zhuǎn)至p c D N A 3 .
2、1 中。結(jié)果:瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示R T .P C R 擴(kuò)增出的特異片段約2 4 8 0 b p ,基因測序結(jié)果與G e n B a n k 報道的完全一致,結(jié)果成功構(gòu)建了H I F .1 a - p c D N A 3 .1 真核表達(dá)載體。結(jié)論:成功將H I F .1 a 基因構(gòu)建到p c D N A 3 .1 真核表達(dá)載體中,經(jīng)測序檢測無堿基改變。第二部分:H I F .1 a - p c D N A 3 .1 表達(dá)載體轉(zhuǎn)染H e
3、 l a 細(xì)胞研究目的:將構(gòu)建的H I F —l a .p c D N A 3 .1 真核表達(dá)載體,在宮頸癌細(xì)胞( H e l a ) q ,進(jìn)行表達(dá)并檢測其蛋白表達(dá)。方法:采用陽離子脂質(zhì)體法將載體轉(zhuǎn)入H e l a 細(xì)胞,觀察H I F - 1 a m R N A 的表達(dá)情況,然后分別用熒光染色和W e s t e r n B l o t 等方法檢測證實轉(zhuǎn)染的有效性。結(jié)果;質(zhì)粒H I F .1 小p c D N A 3 .1 轉(zhuǎn)染H
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