髓核細胞缺氧誘導因子(HIF)-1_缺失影響小鼠椎間盤生理和microRNAs表達的機理研究.pdf

1、目的：⑴探究HIF-1α在椎間盤髓核中的表達及其缺失對椎間盤生理及退變進程的影響。⑵探究HIF-1α缺失對髓核細胞microRNAs表達的影響，進一步探討HIF-1α影響椎間盤退變的機理。
　　方法：①通過免疫染色方法驗證HIF-1α在臨床患者椎間盤髓核組織標本與小鼠椎間盤組織標本中的表達情況。②通過組織學及免疫熒光染色方法觀察小鼠的髓核細胞表型，構(gòu)建條件性敲除髓核細胞HIF-1α基因的小鼠模型。③通過脊柱的MRI及X線等影像學檢

2、查，椎間盤組織學染色觀察，免疫組織化學染色觀察，實時定量PCR檢測mRNA量和Western blot檢測蛋白量等方法，分別對HIF-1α缺失小鼠和正常對照小鼠髓核及椎間盤的生理及退變程度進行比較。④通過microRNA芯片檢測方法，篩選HIF-1α缺失小鼠退變髓核中差異性表達的microRNAs，探討髓核組織退變的機理。
　　結(jié)果：⑴人和小鼠的椎間盤髓核組織中HIF-1α均有表達。⑵小鼠髓核細胞特異性表達CD24，以Shh-cr

3、e作為啟動子可特異敲除髓核細胞HIF-1α基因。⑶同正常對照組小鼠相比較：HIF-1α缺失小鼠在2周齡時出現(xiàn)髓核組織細胞凋亡數(shù)量增多；2周齡時髓核組織出現(xiàn)明顯的退變表現(xiàn)，細胞外基質(zhì)蛋白aggrecan及 collagenⅡ的蛋白含量出現(xiàn)減少；4周齡MRI中椎間盤信號明顯降低；8周時X線顯示椎間盤高度降低；但4周齡時基因缺失小鼠的aggrecan及collagenⅡ的mRNA的表達增高。⑷比較兩組小鼠的椎間盤microRNAs芯片，顯示有

4、10組microRNAs表達發(fā)生紊亂，可能參與髓核細胞的死亡和椎間盤退變。
　　結(jié)論：①在人和小鼠椎間盤髓核細胞中HIF-1α均有表達，可作為髓核細胞特征性表型之一，健康的髓核細胞特異性表達CD24。②HIF-1α缺失后，髓核細胞大量死亡，基質(zhì)蛋白aggrecan及collagenⅡ總量明顯下降，microRNAs的表達紊亂，促使小鼠椎間盤的退變加速，髓核區(qū)域MRI信號減低，椎間隙變狹窄。③HIF-1α對髓核細胞的存活、分化與增殖