缺氧誘導因子-1α和血管內皮生長因子在退變椎間盤中的表達及意義.pdf

1、前言: 椎間盤退變是椎間盤突出的病理基礎，已有大量研究證實了細胞因子在椎間盤退變中起重要作用。最近有研究證實突出人類腰椎間盤中有HIF-1α的表達，認為HIF-1α在人類椎間盤細胞的生存和突出間盤重吸收方面可能起著至關重要的作用。HIF-1α是機體細胞適應低氧的重要轉錄調節(jié)因子，組織處于缺氧狀態(tài)時HIF-1α發(fā)揮轉錄和基因調控作用，是缺氧狀態(tài)下血管生成的核心調控因子，通過上調VEGF的表達并影響其他因子的表達，而直接參與血管生成

2、。為了進一步弄清這一機制在椎間盤退變中是否存在及其作用，采用免疫組織化學技術檢測椎間盤組織中HIF-1α、VEGF的表達，以探討二者與椎間盤退變的關系。 實驗材料和方法: 一、主要試劑及儀器試劑：HIF-1α多克隆抗體、VEGF多克隆抗體、鏈霉親和素-過氧化物酶復合物法(SABC)免疫組化即用型試劑盒及DAB(二氨基聯(lián)苯胺)顯色液(均購自武漢博士德生物工程有限公司)；二甲苯；各濃度梯度酒精。 儀器： Leitz1

3、512型切片機(Leitz，German)；BX60F/PM30-3型顯微照相系統(tǒng)(Olympus，Japan)；Metamorph(NIC，U.S.A)/DP10/BX51(Olympus，Japan)彩色病理圖文分析系統(tǒng)；電子天平；微量移液器。 二、實驗取材及實驗分組 實驗一：選擇因頸椎間盤突出癥而行前路手術切除的椎間盤組織標本40例，其中纖維環(huán)破裂組20例，纖維環(huán)完整組20例。同時選擇20例頸椎骨折行前路減壓內固定

4、術患者的頸椎間盤組織標本作為對照組。每個椎間盤在解剖顯微鏡下分離出纖維環(huán)、髓核和軟骨終板組織。 實驗二：選擇因腰椎間盤突出癥而行后路手術切除的椎間盤組織標本，其中纖維環(huán)破裂組20例；纖維環(huán)完整組20例。同時選擇20例腰椎骨折行椎管減壓內固定術患者的椎間盤組織標本作為對照組。每個椎間盤在解剖顯微鏡下分離出纖維環(huán)和髓核。 三、實驗方法、檢測指標及染色結果的判斷標準 (一)實驗方法、檢測指標： 1、HE染色進行

5、形態(tài)學觀察。 2、免疫組織化學法(SABC法)檢測HIF-1α、VEGF的表達情況。 3、免疫反應切片在BX60F/PM30-3型顯微照相系統(tǒng)(Olympus，，Japan)下觀察并攝像。 4、圖片應用Metamorph(NIC，U.S.A.)/DP10/BX51(Olympus，Japan)彩色病理圖文分析系統(tǒng)進行免疫反應產物顯微圖像分析，得出平均光密度值和積分平均光密度值。 (二)染色結果的判斷標準本

6、實驗用DAB顯色，HIF-1a的陽性表達為胞核和胞漿內棕黃色顆粒，主要位于胞漿。VEGF的陽性表達為胞漿內的棕黃色顆粒。 四、數(shù)據(jù)分析 實驗一、采用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)：采用單因素方差分析法中LSD及DUNNETT檢驗分析總體差異及各組間差異。 實驗二、采用spss11.5統(tǒng)計軟件進行分析，統(tǒng)計方法采用方差分析，各組間兩兩比較采用LSD法，計算Pearson相關系數(shù)分析相關性。 實驗結果:

7、 實驗一、退變頸椎間盤組織中有缺氧誘導因子-1α高表達，尤其在髓核細胞更為顯著，HIF-1α的表達在纖維環(huán)破裂組顯著高于纖維環(huán)完整組。 實驗二、退變腰椎間盤組織中HIF-1α和VEGF呈高表達，HIF-1α和VEGF在髓核的表達顯著高于纖維環(huán)；纖維環(huán)破裂型顯著高于纖維環(huán)完整型；各組中HIF-1α和VEGF的表達均高度相關。 結論: 1、退變頸椎間盤組織中缺氧誘導因子-1α的表達與突出類型相關，缺氧誘導因子-