內(nèi)皮素-1、血管內(nèi)皮生長因子、缺氧誘導(dǎo)因子-1在新生鼠肺出血發(fā)生中的作用.pdf

1、第一部分低溫缺氧/復(fù)溫供氧新生鼠肺出血模型的分段建立 目的 分段建立低溫缺氧/復(fù)溫供氧新生鼠肺出血模型，探討新生鼠在缺氧、低溫缺氧、低溫缺氧后常氧復(fù)溫、低溫缺氧后高氧復(fù)溫等不同影響因素作用下肺大體和組織學(xué)的改變； 方法 選用出生后7～8天的Wister新生鼠58只，隨機(jī)分為正常組(C組)10只，缺氧組(H組)，低溫缺氧組(HH組)，低溫缺氧后常氧復(fù)溫組(HHR)和低溫缺氧后高氧復(fù)溫組(HHRO<,2>組)各12只。C

2、組置常溫室內(nèi)，H組予缺氧(F1O<,2>5～6％)6h，HH組缺氧同時置10±1℃冷室內(nèi)，予低溫缺氧6h，HHR組同HH組進(jìn)行低溫缺氧6h，然后置37℃環(huán)境復(fù)溫并吸入空氣(常氧)2h，HHRO<,2>組同HHR組，但復(fù)溫時供高濃度氧(FiO<,2>>95％)。各組新生鼠處死后取肺組織，觀察肺大體情況，切片HE染色觀察肺組織病理學(xué)改變。肺大體改變按等級不同分為5級。 結(jié)果 1．實(shí)驗(yàn)組新生鼠共死亡13只，死亡率27.08％(13/

3、48)，c組無死亡；2.H組、HH組、HHR組和HHRO<,2>組肺大體均有改變，H組呈現(xiàn)水腫，HH瘀血明顯，可見點(diǎn)狀和局灶性出血，HHR組和HHRO<,2>組見局灶出血增多，HHR組有2例彌漫性出血，HHRO<,2>組有4例呈彌漫性出血，彌漫性肺出血主要發(fā)生在復(fù)溫復(fù)氧階段；各實(shí)驗(yàn)組肺大體改變與C組比較均有顯著性差異；組間比較除HHR組與HHRO<,2>組外，其余各組間比較均有顯著性差異。3．各實(shí)驗(yàn)組組織學(xué)改變包括肺泡及間質(zhì)水腫、肺間隔

4、斷裂、肺泡擴(kuò)張及融合和肺泡出血。 結(jié)論 低溫缺氧/復(fù)溫供氧能成功誘發(fā)新生鼠肺出血，肺出血發(fā)生由肺內(nèi)皮素-l、血管內(nèi)皮生長因子、缺氧誘導(dǎo)因子-1在新生鼠肺出血發(fā)生中的作用水腫向點(diǎn)狀肺出血、局灶肺出血、彌漫性肺出血發(fā)展，彌漫性肺出血主要發(fā)生在復(fù)溫供氧后；缺氧、低溫缺氧及復(fù)溫供氧各階段均對肺組織造成損傷；高濃度氧可能造成更嚴(yán)重?fù)p傷。 第二部分內(nèi)皮素-1、血管內(nèi)皮生長因子、缺氧誘導(dǎo)因子-1在新生鼠肺出血發(fā)生過程中肺內(nèi)的表達(dá)

5、 目的 探討在低溫缺氧/復(fù)溫供氧新生鼠肺出血過程中內(nèi)皮素-1(ET-1)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、缺氧誘導(dǎo)因子-1(HIF-1)在肺組織中的表達(dá)與作用。 方法 選用出生后7～8天的Wister新生鼠58只，隨機(jī)分為正常組(C組)10只，缺氧組(H組)，低溫缺氧組(HH組)，低溫缺氧后常氧復(fù)溫組(HHR)和低溫缺氧后高氧復(fù)溫組(HHRO<,2>組)各12只，模型分段復(fù)制過程同第一部分。分別采用逆轉(zhuǎn)錄．聚合酶鏈反應(yīng)(R

6、T-PCR)方法檢測肺組織中前內(nèi)皮素原mRNA(ppET-1mRNA)、VEGFmRNA、缺氧誘導(dǎo)因子-1amRNA(HIF-1amRNA)的表達(dá)；放射免疫方法檢測肺組織中ET-1含量；Western Blot方法和免疫組化方法檢測VEGF在肺組織中的表達(dá)。 結(jié)果 1．ppET-1mRNA在H組、HH組、HHRO<,2>組表達(dá)增強(qiáng)，與C組比較，P均<0.01；ET-1含量在各實(shí)驗(yàn)組均增高，進(jìn)入復(fù)溫供氧期后有所下降，各組與C組比

7、較P均<0.01；在H組、HH組，ppET-1mRNA表達(dá)與肺組織中ET-1含量呈正相關(guān)，分別r=0.72和r=0.67,P均<0.05。2．VEGFl88mRNA在H組、HH組表達(dá)增強(qiáng)，與C組比較，P均<0.01；VEGF蛋白在各實(shí)驗(yàn)組表達(dá)增強(qiáng)，與C組比較，H組、HH組P均<0.05，HHR組和HItR02組P均<0.01。3．在H、HH組，ET-1與VEGF表達(dá)成正相關(guān)，分別r=0.72和r=0.66，P均<0.05；4．HIF-1

8、amRNA表達(dá)在各組中無顯著性差異，P>0.05。 結(jié)論 1．ET-1和VEGF在各個階段都參與肺出血的形成；2．ET-1可能促進(jìn)了’VEGF的表達(dá)；3．HIF-1 α在肺出血中作為核轉(zhuǎn)錄因子參與調(diào)控ET-1和VEGF的表達(dá)，但低氧對其調(diào)控主要在轉(zhuǎn)錄后水平。 第三部分 內(nèi)皮素-1雙重受體阻斷劑對新生鼠肺出血的預(yù)防作用 目的 觀察ET-1雙重受體阻斷劑(波生坦)能否降低低溫缺氧/復(fù)溫供氧新生鼠肺出血發(fā)生率以及肺

9、組織中VEGF的表達(dá)，評價(jià)波生坦在預(yù)防肺出血發(fā)生中的作用。 方法 選用出生后7～8天的Wister新生鼠106只，隨機(jī)分為正常組(C組)10只，實(shí)驗(yàn)組和波生坦組各48只；實(shí)驗(yàn)組和波生坦組再分為H、HH、HHR、mtRO<,2>4個亞組各12只，波生坦組實(shí)驗(yàn)前2h經(jīng)胃管灌注波生坦，模型分步復(fù)制過程同第一部分。觀察各組肺大體改變，采用Western Blot方法檢測VEGF在肺組織中的表達(dá)。 結(jié)果 1．波生坦組新生鼠死亡

10、5只，實(shí)驗(yàn)組死亡13只，兩組死亡率比較有顯著性差異，X<'2>=3.35，P<0.05；2．實(shí)驗(yàn)組肺大體改變同第一部分，包括水腫、點(diǎn)狀出血、局灶性出血甚至彌漫性出血，波生坦組中各亞組肺大體改變均較實(shí)驗(yàn)組有所減輕，從HH亞組開始仍見點(diǎn)狀肺出血發(fā)生，HHR和HHR<,2>亞組可見局灶性出血，但未出現(xiàn)彌漫性出血，HHR和HHRO<,2>亞組肺大體改變與實(shí)驗(yàn)組相應(yīng)亞組比較有顯著性差異，分別T=193.5，P<0.05和T=199.0，P<0.0