缺氧誘導(dǎo)因子-1α和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在腎細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、研究背景和目的腎癌又稱腎細(xì)胞癌、腎腺癌，是最常見(jiàn)的腎臟實(shí)質(zhì)性腫瘤，其起病隱襲，死亡率高，根據(jù)統(tǒng)計(jì)，發(fā)病率居泌尿系腫瘤第二位。侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的生物學(xué)特征之一，腎癌也不例外，由于腎癌早期缺乏典型的臨床癥狀，大約1/4-1/3病人就醫(yī)時(shí)已有轉(zhuǎn)移，可有血行轉(zhuǎn)移，也可以經(jīng)淋巴轉(zhuǎn)移。研究腎癌侵襲和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，不僅有助于為臨床判斷預(yù)后提供有價(jià)值的分子標(biāo)記物，而且有助于設(shè)計(jì)和尋找抗腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的新思路和新途徑，進(jìn)一步改善腎癌的預(yù)后。

2、 缺氧誘導(dǎo)因子(hypoxiainduciblefactor,HIF)最先由Semenza于1992年在缺氧細(xì)胞的細(xì)胞核提取物中發(fā)現(xiàn)，是在缺氧條件下廣泛存在于哺乳動(dòng)物和人體內(nèi)的一種轉(zhuǎn)錄因子，廣泛參與哺乳動(dòng)物細(xì)胞中缺氧誘導(dǎo)產(chǎn)生的特異應(yīng)答。作為介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞缺氧適應(yīng)的關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，HIF-1α在許多腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，并和腫瘤的生物學(xué)行為密切相關(guān)，已成為近年來(lái)腫瘤學(xué)研究中的一個(gè)新的熱點(diǎn)。 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascularendo

3、thelialgrowthfactor，VEGF)是參與腫瘤血管生成的主要調(diào)控因子，其作為促血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂原，是上調(diào)血管生成的重要因子，能特異性地直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷徙及血管腔形成，是血管形成必不可少的因子。VEGF通過(guò)刺激血管形成而促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，并與腫瘤的預(yù)后密切相關(guān)。 HIF-1α調(diào)控包括VEGF及VEGF受體編碼基因在內(nèi)的至少40多種靶基因，涉及細(xì)胞的能量代謝、血管生成、腫瘤

4、轉(zhuǎn)移、離子代謝和兒茶酚胺代謝等。HIF-1α可在基因水平上直接調(diào)控VEGF的表達(dá)，在維持腫瘤細(xì)胞的能量代謝、新血管的形成和轉(zhuǎn)移中起重要作用。大量研究表明，HIF-1α、VEGF在多種腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)，其表達(dá)與腫瘤侵潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。但迄今為止，對(duì)HIF-1α、VEGF在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)及其與腎細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究國(guó)內(nèi)未見(jiàn)報(bào)道。本研究目的是檢測(cè)HIF-1α和VEGF在腎細(xì)胞癌中的表達(dá)，探討二者間的關(guān)系及其在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用，以期尋

5、找判斷腎細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移及估計(jì)預(yù)后可靠的分子標(biāo)記物和抗腫瘤治療新靶點(diǎn)。 方法選取2003年1月至2004年12月在我院手術(shù)治療的腎細(xì)胞癌患者中的42例，其中男30例，女12例；左側(cè)22例，右側(cè)20例；年齡35～81歲，平均53.6歲；腫瘤直徑＞7cm13例，≤7cm29例。病理診斷：透明細(xì)胞癌27例，顆粒細(xì)胞癌15例；經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)伴轉(zhuǎn)移者18例，無(wú)轉(zhuǎn)移者24例，所有患者術(shù)前均未接受放療、化療及免疫治療。同時(shí)選取10例癌旁正常腎組織

6、(遠(yuǎn)離腫瘤邊緣＞5cm)作為對(duì)照，用免疫組織化學(xué)SABC法檢測(cè)HIF-1α及VEGF蛋白的表達(dá)。用已知陽(yáng)性結(jié)腸癌切片作陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗作陰性對(duì)照。手術(shù)切取標(biāo)本，甲醛固定，石蠟包埋，免疫組織化學(xué)具體操作按說(shuō)明書染色步驟進(jìn)行。HIF-1α染色：陽(yáng)性細(xì)胞胞核或胞漿內(nèi)呈棕黃色顆粒著色。在高倍鏡下，對(duì)每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野，計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞/視野，共計(jì)1000個(gè)。陰性：腫瘤組織完全不著色或陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜5％；陽(yáng)性：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞5％。VEG

7、F染色：以組織細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒且著色細(xì)胞數(shù)＞25％為陽(yáng)性。應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用四格表及配對(duì)計(jì)數(shù)資料的x2檢驗(yàn)。 結(jié)果HIF-1α主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞胞核，細(xì)胞質(zhì)也有表達(dá)，正常腎組織不表達(dá)。其陽(yáng)性細(xì)胞主要出現(xiàn)于腫瘤邊緣或與正常組織交界處，在壞死的腫瘤組織中也可出現(xiàn)；VEGF陽(yáng)性表達(dá)主要在細(xì)胞質(zhì)及膜上，部分周圍血管內(nèi)皮細(xì)胞呈弱陽(yáng)性表達(dá)。本研究42例腎細(xì)胞癌組織中HIF-1α陽(yáng)性24例(57.

8、1％)，與癌旁及正常組織比較有顯著性差異(P＜0.01)；VEGF陽(yáng)性26例(61.9％)，與對(duì)照組(陽(yáng)性表達(dá)率為20％)相比有顯著性差異(P＜0.05)。兩者表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤大小及病理學(xué)類型無(wú)明顯相關(guān)性。癌轉(zhuǎn)移患者與無(wú)癌轉(zhuǎn)移者HIF-1α、VEGF比較均有顯著性差異(P＜0.01)。HIF-1α和VEGF表達(dá)有相關(guān)性(Kappa=0.41，P＜0.01)。 結(jié)論1.HIF-1α在腎細(xì)胞癌組織中呈高表達(dá)，其與VEGF有