納米乳營(yíng)養(yǎng)素透皮傳遞系統(tǒng)的研究.pdf

1、營(yíng)養(yǎng)素補(bǔ)充劑是指由一種或多種必需的微量營(yíng)養(yǎng)素組成的產(chǎn)品，如維生素和礦物質(zhì)。近年來(lái)，我國(guó)居民食物質(zhì)量和營(yíng)養(yǎng)攝入較過(guò)去都有明顯改善，但營(yíng)養(yǎng)不良問(wèn)題仍嚴(yán)重存在，主要表現(xiàn)在營(yíng)養(yǎng)攝人不足和營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)失衡.直接后果是與營(yíng)養(yǎng)相關(guān)的慢性退行性疾病的快速增長(zhǎng)。適量補(bǔ)充外源性維生素、礦物質(zhì)，可彌補(bǔ)膳食供給的不足、預(yù)防營(yíng)養(yǎng)缺乏和降低發(fā)生某些慢性退行性疾病的風(fēng)險(xiǎn)性，是改善營(yíng)養(yǎng)不良的有效途徑之一。
　　 營(yíng)養(yǎng)素補(bǔ)充劑的劑型目前以口服和注射為主，注射的優(yōu)點(diǎn)是

2、吸收迅速，主要應(yīng)用于接受腸外營(yíng)養(yǎng)支持的病人。缺點(diǎn)是必須考慮使用的安全性，因此應(yīng)在醫(yī)院里由護(hù)士使用，而不適合個(gè)人單獨(dú)應(yīng)用；口服營(yíng)養(yǎng)素補(bǔ)充劑的應(yīng)用非常廣泛，是目前營(yíng)養(yǎng)素補(bǔ)充劑最主要的補(bǔ)充方式。但是對(duì)于胃腸道功能紊亂、某些特殊作業(yè)條件下(如消防隊(duì)員、礦業(yè)工人、化工生產(chǎn)、宇航人員等應(yīng)激或有害的作業(yè)環(huán)境)以及老人、小孩等，口服補(bǔ)充存在一定的局限性，依從性不高。基于以上，我們認(rèn)為有必要探討一種新的營(yíng)養(yǎng)素補(bǔ)充途徑。
　　 透皮給藥系統(tǒng)已經(jīng)在藥

3、學(xué)上得到了廣泛的應(yīng)用，如在治療心絞痛、運(yùn)動(dòng)病、止痛、高血壓以及女性/男性激素替代療法中都采用了經(jīng)皮給藥系統(tǒng)。而在營(yíng)養(yǎng)素的透皮給藥系統(tǒng)研究中，目前大量研究集中在化妝品領(lǐng)域，如維生素C、維生素A等采用經(jīng)皮給藥系統(tǒng)，達(dá)到局部治療的作用。但是對(duì)于要起到全身作用的營(yíng)養(yǎng)素補(bǔ)充劑來(lái)說(shuō)，目前國(guó)內(nèi)外均無(wú)該方面的研究報(bào)道。與傳統(tǒng)藥物經(jīng)皮給藥系統(tǒng)比較，營(yíng)養(yǎng)素經(jīng)皮給藥系統(tǒng)的研究難點(diǎn)在于如何制備適當(dāng)?shù)妮d藥載體，以幫助各營(yíng)養(yǎng)素滲透進(jìn)深部皮膚，從而進(jìn)入血液循環(huán)達(dá)到全

4、身作用。
　　 納米乳是一種熱力學(xué)穩(wěn)定的體系，它的高度分散性使其具備了高度的皮膚或生物膜滲透性能。當(dāng)納米乳涂布皮膚后，水被吸收從而出現(xiàn)過(guò)飽和現(xiàn)象。過(guò)飽和的出現(xiàn)使藥物熱力學(xué)活性增加，藥物極易由納米乳中向皮膚內(nèi)釋放。由于藥物擴(kuò)散通過(guò)基底層，進(jìn)入皮膚更深部位的藥物量迅速增加。
　　 本課題以納米乳作為載體，維生素A棕櫚酸酯和維生素B1為模型營(yíng)養(yǎng)素，研究可以攜帶不同水溶性、脂溶性的維生素進(jìn)入皮膚深部，從而發(fā)揮其全身作用，達(dá)到營(yíng)養(yǎng)

5、素補(bǔ)充的作用的納米乳透皮傳遞系統(tǒng)的制備工藝及影響因素，并對(duì)其體內(nèi)外釋藥的性質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)，以其為開(kāi)辟新的營(yíng)養(yǎng)素補(bǔ)充途徑打下重要的基礎(chǔ)。
　　 研究方法:
　　 1.納米乳的制備及理化性質(zhì)的考察
　　 1.1在具塞的平底玻璃試管中，將表面活性劑與助表面活性劑按一定比例(如1∶1，1∶2，2∶1等)混合溶解，混合物在室溫(25±1℃)下加入油相(含維生素A棕櫚酸酯)用恒溫磁力攪拌器攪拌，攪拌下用蒸餾水(含維生素B1)滴定

6、三種成分的混合物，直至澄清透明的納米乳形成。繼續(xù)滴定，觀察可能發(fā)生的變化，以確定納米乳區(qū)界限。本研究采用吐溫-80(Tween-80)，聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor EL-35)及聚氧乙烯氫化蓖麻油(Cremophor RH-40)做為待考察表面活性劑；乙醇，丙二醇，甘油作為助表面活性劑；亞油酸乙酯，十四酸異丙酯，花生油，豆油作為油相；生理鹽水，葡萄糖溶液為水相，同時(shí)考察表面活性劑與助表面活性劑質(zhì)量比(Km)和溫度的變化對(duì)納米乳制

7、備及制備區(qū)域大小的影響。
　　 1.2在待考察的納米乳組分的擬三元相圖納米乳區(qū)域中選擇某納米乳比例測(cè)定各組納米乳的粒徑、粘度，并考察不同組分對(duì)其粒徑、粘度的影響。結(jié)合擬三元相圖，選擇納米乳區(qū)域大、粒徑、粘度適宜的納米乳處方。
　　 2.營(yíng)養(yǎng)素透皮傳遞系統(tǒng)體外透皮實(shí)驗(yàn)
　　 2.1建立維生素A含量測(cè)定方法
　　 建立以高效液相色譜法(high-performance liquid chromatograph

8、y,HPLC)測(cè)定維生素A棕櫚酸酯含量的方法。色譜條件如下：色譜柱：DiamonsilC18柱(250×4.6mm,粒徑5μm)；流動(dòng)相∶甲醇-乙腈-水(VNN：66∶32∶2)，使用前超聲處理；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：275nm；柱溫:室溫；檢測(cè)靈敏度：1AUFS；進(jìn)樣量：20μl。并進(jìn)行精密度、重現(xiàn)性、回收率實(shí)驗(yàn)。以濃度C(Ug/ml)對(duì)峰面積A進(jìn)行線性回歸，得到維生素A棕櫚酸酯標(biāo)準(zhǔn)曲線。
　　 2.2建立維生素

9、B1測(cè)定方法
　　 建立以紫外分光光度法測(cè)定維生素B1含量的方法。精密稱取維生素B1對(duì)照品加鹽酸溶液(9-1000)稀釋至刻度，搖勻，制成系列濃度的溶液，在246nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。并進(jìn)行精密度、重現(xiàn)性、回收率實(shí)驗(yàn)。以濃度C(μg/ml)對(duì)吸收度A進(jìn)行線性回歸，得到維生素B1標(biāo)準(zhǔn)曲線。
　　 2.3Franz擴(kuò)散池體外透皮實(shí)驗(yàn)
　　 根據(jù)納米乳的組成特點(diǎn)，利用水平Franz擴(kuò)散池進(jìn)行體外透皮實(shí)驗(yàn)，通過(guò)正交設(shè)計(jì)

10、，考察納米乳各組分因素對(duì)納米乳累積釋藥量的影響，優(yōu)化透皮系統(tǒng)的處方。選用180～200g左右雄性SD大鼠腹部皮膚，剝離腹部皮膚，小心刮去皮下脂肪組織和粘連物，用生理鹽水清洗干凈，用濾紙拭干，直接使用。將皮膚平整置于水平Franz擴(kuò)散池結(jié)合部，角質(zhì)層面向供給池，真皮層面向接受池，在37±0.1℃恒溫水浴擴(kuò)散池中加入納米乳4ml，接受液為4ml生理鹽水。分別于于不同時(shí)間點(diǎn)從接受池中取樣0.5ml，同時(shí)補(bǔ)入37±0.1℃生理鹽水0.5ml。按

11、照已經(jīng)建立的維生素A棕櫚酸酯和維生素B1的含量測(cè)定方法，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出各時(shí)間點(diǎn)接受池中兩種維生素的濃度，繪制體外透皮釋放曲線，計(jì)算12h累積滲透量(Q)。
　　 2.4營(yíng)養(yǎng)素透皮傳遞系統(tǒng)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
　　 按照優(yōu)化處方制備納米乳透皮傳遞系統(tǒng)，并于室溫和40℃下放置3個(gè)月，通過(guò)藥物濃度的變化考察其穩(wěn)定性。
　　 3.營(yíng)養(yǎng)素透皮傳遞系統(tǒng)皮膚刺激性研究
　　 分別進(jìn)行單次給藥和多次給藥的皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)。

12、　　 單次給藥實(shí)驗(yàn)采用SD大鼠同體左右側(cè)自身對(duì)比，分完整皮膚組及破損皮膚組。左側(cè)去毛區(qū)涂布自制納米乳1g，右側(cè)涂空白納米乳作為對(duì)照。給藥24h后，用溫水洗去殘留的藥物，去除藥物后肉眼觀察并記錄涂抹部位有無(wú)紅斑和水腫情況，計(jì)算各組動(dòng)物反應(yīng)平均分值。并對(duì)刺激強(qiáng)度作出評(píng)價(jià)。多次給藥實(shí)驗(yàn)每天1次，連續(xù)涂抹1周。于術(shù)次給藥24h后，用溫水沈去殘留的藥物，去除藥物后用肉眼觀察并記錄涂抹部位有無(wú)紅斑和水腫情況，進(jìn)行評(píng)分，計(jì)算各組動(dòng)物反應(yīng)平均分值，并

13、對(duì)刺激強(qiáng)度作出評(píng)價(jià)。并觀察涂抹部位是否有色素沉著、出血點(diǎn)、皮肽粗糙或皮膚菲薄等情況，記錄其發(fā)生時(shí)間及消退時(shí)間。
　　 4.營(yíng)養(yǎng)素透皮傳遞系統(tǒng)藥代動(dòng)力學(xué)研究
　　 4.1建立血清維生素A棕櫚酸酯含量測(cè)定方法
　　 色譜條件如下：分析柱為DiamonsilC18柱(250×4.6mm,粒徑5μm)；檢測(cè)波長(zhǎng)325 nm；流動(dòng)相∶甲醇∶水(95∶5，V/V)；流速1.2 ml/min；進(jìn)樣量20μl。并進(jìn)行精密度、重現(xiàn)

14、性、回收率實(shí)驗(yàn)。以濃度C(ng/ml)對(duì)峰面積A進(jìn)行線性回歸，得到維生素A棕櫚酸酯標(biāo)準(zhǔn)曲線。
　　 4.2營(yíng)養(yǎng)素透皮傳遞系統(tǒng)藥代動(dòng)力學(xué)
　　 以SD大鼠為研究對(duì)象，給藥前禁食12h，自由飲水。在其去毛區(qū)涂布自制納米乳1ml。于給藥后0.5、1、2、3、4、8、12、24、48h，從大鼠眼眶取血0.5ml，按建立的維生素A棕櫚酸酯含量測(cè)定方法進(jìn)行含量測(cè)定。并求算有關(guān)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
　　 結(jié)論:
　　 1.

15、選擇聚氧乙烯氫化蓖麻油(Cremophor RH-40)為表面活性劑，乙醇為助表面活性劑，十四酸異丙酯(IPM)為油相，可制備出穩(wěn)定的納米乳，其粒徑、粘度等理化性質(zhì)均符合要求。
　　 2.根據(jù)體外透皮滲透實(shí)驗(yàn)，優(yōu)化的納米乳透皮傳遞系統(tǒng)最佳處方為：水相(％)∶油相(IPM,％)∶Km(Cremophor RH-40∶乙醇)為:40∶10∶(4∶1)，在室溫和40℃的條件下，保存3個(gè)月對(duì)維生素A棕櫚酸酯和維生素B1含量無(wú)影響。

16、>　　 3.通過(guò)單次和多次給藥皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)，自制的納米乳透皮傳遞系統(tǒng)應(yīng)用后，皮膚無(wú)紅斑、水腫等現(xiàn)象，表明該制劑對(duì)皮膚無(wú)刺激性。
　　 4.大鼠給予納米乳營(yíng)養(yǎng)素透皮傳遞系統(tǒng)后3 h，血清內(nèi)維生素A棕櫚酸酯濃度達(dá)峰值。48h AUC0-48h為2403.42ng/ml×h。
　　 綜上所述，我們以維生素A棕櫚酸酯和維生素B1為模型藥物，研制的納米乳營(yíng)養(yǎng)素透皮傳遞系統(tǒng)通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均表明，其中的營(yíng)養(yǎng)素可以透過(guò)皮膚的屏障作用