浙江漢族人群?jiǎn)魏塑账岫鄳B(tài)性與胸主動(dòng)脈瘤遺傳易感性的研究.pdf

1、研究背景及目的:
　　 胸主動(dòng)脈瘤是一類逐漸被引起重視的心血管疾病，具有致死致殘率高、治療難度大等特點(diǎn)。其發(fā)病由多種高危因素促成，雖然該病主要為散發(fā)形式，然而遺傳因素在其中占有重要作用，通過(guò)遺傳學(xué)水平研究由于基因多態(tài)性產(chǎn)生的不同程度的遺傳易感性，可加深對(duì)本疾病發(fā)病機(jī)制的進(jìn)一步認(rèn)識(shí)，并為疾病的防治提供重要依據(jù)。隨著人類基因組計(jì)劃的完成和單體型圖譜的構(gòu)建，以及高通量基因分型技術(shù)的快速發(fā)展，全基因組關(guān)聯(lián)性研究應(yīng)勢(shì)而生，并成為目前探索復(fù)

2、雜疾病易感性遺傳因素最為有效的方法。近年來(lái)幾個(gè)國(guó)外研究中心以西方人群為主要研究對(duì)象進(jìn)行了基于全基因組關(guān)聯(lián)性研究，發(fā)現(xiàn)多組單核苷酸多態(tài)性與胸主動(dòng)脈瘤發(fā)病相關(guān)。如Vasan等延續(xù)Framingham心臟研究等，通過(guò)meta分析發(fā)現(xiàn)rs10852932，rs17470137，rs4026608等單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)與美國(guó)白人主動(dòng)脈根部擴(kuò)張程度有關(guān)，潛在相關(guān)的基因包括CCDC100，PDE3A，HMGA2，SMG6，SRR，TSR等。W

3、ineinger等通過(guò)高血壓病的多中心研究——HyperGEN研究，發(fā)現(xiàn)位于7號(hào)染色體的CRCP和KCTD7基因之間、以及20號(hào)染色體的SIRPA和PDYN基因之間的大片編碼區(qū)域和非裔美國(guó)人主動(dòng)脈根部瘤樣擴(kuò)張相關(guān)，關(guān)聯(lián)SNP包括rs10263935、rs6045676等。LeMaire等以歐裔白人的胸主動(dòng)脈真性動(dòng)脈瘤及夾層患者為研究對(duì)象進(jìn)行GWAS研究，發(fā)現(xiàn)FBN1基因多個(gè)相關(guān)SNP與之發(fā)病相關(guān)。而目前在我國(guó)，心血管疾病的遺傳學(xué)研究對(duì)象

4、主要以集中在冠心病，高血壓等高發(fā)疾病為主，胸主動(dòng)脈疾病發(fā)病率相對(duì)較低，引起的關(guān)注相對(duì)較小。然而，胸主動(dòng)脈瘤往往起病兇險(xiǎn)，自然病程預(yù)后不佳，對(duì)其疾病發(fā)生機(jī)制有必要進(jìn)一步深入研究。進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性與胸主動(dòng)脈瘤遺傳易感性的相關(guān)研究，對(duì)加深此類疾病的發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)，具有重要意義。
　　 近年來(lái)，以單核苷酸多態(tài)性為基礎(chǔ)，通過(guò)進(jìn)一步的研究方式，如單倍體型研究和基因交互作用研究等，在高血壓、冠心病、腹主動(dòng)脈瘤等心血管疾病研究領(lǐng)域取得了重要研

5、究成果。然而在胸主動(dòng)脈瘤方面，以我國(guó)漢族人群為研究對(duì)象，仍然鮮在單倍體型及基因交互作用分析水平上的研究成果，以此為研究手段，可進(jìn)一步探究我國(guó)漢族人群的胸主動(dòng)脈瘤疾病的致病遺傳因素。
　　 目前認(rèn)為，相同疾病在不同種族、人群之間致病基因及發(fā)生機(jī)制可能會(huì)有不同?；趪?guó)外相關(guān)研究進(jìn)展以我國(guó)漢族人群為研究對(duì)象，在基因水平上研究我國(guó)漢族人群遺傳易感性與胸主動(dòng)脈瘤的關(guān)系，確認(rèn)相關(guān)高危SNP位點(diǎn)、進(jìn)而研究高危單倍體型和潛在的基因交互關(guān)系，有望

6、進(jìn)一步加深對(duì)胸主動(dòng)脈瘤的發(fā)病機(jī)理的認(rèn)識(shí)，為疾病預(yù)防、診斷、治療等方面提供新的思路。
　　 研究對(duì)象與方法:
　　 以浙江地區(qū)漢族人群為研究對(duì)象，采用病例對(duì)照研究方法，按照成組匹配原則入組胸主動(dòng)脈瘤患者病例組及健康人群對(duì)照組，獲取病例組及健康人群臨床信息，對(duì)病例組進(jìn)行臨床診斷分型。提取研究對(duì)象的血樣或主動(dòng)脈組織DNA，采用直接測(cè)序法檢測(cè)候選SNP位點(diǎn):rs10263935，rs10757278，rs1333049，rs10

7、519177，rs9806323，rs1036477，rs2118181，rs6045676及其基因型。對(duì)對(duì)照組人群進(jìn)行Hardy-Weinberg檢驗(yàn)。運(yùn)用SHESIS軟件，采用Pearson卡方檢驗(yàn)比較對(duì)照組和病例組之間8個(gè)單核苷酸多態(tài)性多態(tài)性位點(diǎn)及各基因型分布差異，采用logistic回歸模型計(jì)算OR值和95％可信區(qū)間。對(duì)同一染色體的多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行單倍體型分析，得出與疾病相關(guān)的高危或保護(hù)性單倍體型，并采用多因素降維法(MDR)進(jìn)行

8、多因素交互作用分析，判斷在胸主動(dòng)脈疾病發(fā)生機(jī)制中可能的基因間交互作用。
　　 結(jié)果:
　　 病例組51例，其中男性36例，女性15例。根據(jù)胸主動(dòng)脈診療指南，進(jìn)行病例亞組分組，其中符合胸主動(dòng)脈真性動(dòng)脈瘤診斷病例34例，胸主動(dòng)脈夾層診斷病例35例（有18例病例符合兩種共同診斷），升主動(dòng)脈病變組40例，非遺傳綜合征病例組44例。
　　 健康人群對(duì)照組79例，男性53例，女性26例。對(duì)照組樣本的8個(gè)SNP位點(diǎn)的基因型分布

9、均符合Hardy-Weinberg平衡(p＞0.05），說(shuō)明本研究選取的對(duì)照組SNP位點(diǎn)基因型頻率處于平衡狀態(tài)，具有群體代表性。
　　 對(duì)8個(gè)SNP位點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果在病例組及各個(gè)亞組和對(duì)照人群樣本進(jìn)行Pearson卡方檢驗(yàn)，并采用logistic回歸模型計(jì)算OR值和95％可信區(qū)間，結(jié)果顯示CDKN2B基因相關(guān)的rs1333049 GG基因型攜帶者增加胸主動(dòng)脈瘤患病風(fēng)險(xiǎn)(OR=2.533);且各主要亞組結(jié)果也基本一致;FBN1基因相關(guān)

10、的rs10519177的A等位基因在總體胸主動(dòng)脈瘤患者病例組的分布頻率高于對(duì)照組具有顯著性差異，AA基因型增加胸主動(dòng)脈瘤患病風(fēng)險(xiǎn)(OR=2.383)，提示該基因型為危險(xiǎn)因素，GG基因型降低胸主動(dòng)脈瘤患病風(fēng)險(xiǎn)(OR=0.207)，提示其為保護(hù)因素，且各主要亞組結(jié)果也基本一致;rs6045676等位基因分布頻率和基因型頻率在整體病例組與對(duì)照組之間無(wú)明顯差異;但A等位基因在胸主動(dòng)脈夾層亞組分布頻率高于對(duì)照組且有顯著性差異，AA基因型增加胸主動(dòng)

11、脈夾層患病風(fēng)險(xiǎn)(OR=2.684)，其余亞組均無(wú)顯著性差異。另5個(gè)SNP位點(diǎn):rs10263935，rs10757278，rs9806323，rs1036477，rs2118181在病例組及各個(gè)亞組和對(duì)照組之間的等位基因頻率及基因型頻率分布無(wú)顯著性差異。
　　 連鎖不平衡檢驗(yàn)顯示:CDKN2B-AS1基因相關(guān)的rs10757278，rs1333049之間存在較強(qiáng)水平的連鎖不平衡;FBN1基因相關(guān)的rs10519177，rs980

12、6323，rs1036477，rs2118181之間存在連鎖不平衡，其中rs1036477與rs2118181之間連鎖不平衡水平較強(qiáng)。結(jié)合各個(gè)位點(diǎn)在染色體的距離，結(jié)果符合預(yù)期。
　　 單倍體型分析結(jié)果顯示，部分FBN1基因相關(guān)單倍體型與浙江地區(qū)漢族人群胸主動(dòng)脈瘤發(fā)病相關(guān):AAAT組合(OR=2.291)、ATGC組合(OR=5.826)、ATGT組合(OR=11.595)以及GTGT組合增加患病風(fēng)險(xiǎn);常見(jiàn)單倍體型GAGC組合(O

13、R=0.377)降低患病風(fēng)險(xiǎn)。而CDKN2B-AS1基因相關(guān)單倍體型中少見(jiàn)的兩種單倍體型，GG組合(OR=9.721)增加浙江漢族人群各類胸主動(dòng)脈瘤患病風(fēng)險(xiǎn)，AC組合(OR=10.156)僅增加浙江地區(qū)漢族女性人群胸主動(dòng)脈瘤患病風(fēng)險(xiǎn)。
　　 多因子降維分析顯示:在整體病例組中最佳多因素交互模型為二因子模型由rs1333049和rs10519177組成(Testing accuracy=0.6526，P of permutatio

14、n＜0.0001)，十重交叉驗(yàn)證的一致率為10∶10，“高危”人群是非上述組合的“低?！比巳盒刂鲃?dòng)脈瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的5.31倍，與FBN1相關(guān)的rs10519177位點(diǎn)在交互作用中起主導(dǎo)作用。并且此二因子模型對(duì)胸主動(dòng)脈夾層亞組、非遺傳綜合征胸主動(dòng)脈瘤亞組及升主動(dòng)脈動(dòng)脈瘤亞組均為最優(yōu)模型。僅在胸主動(dòng)脈真性動(dòng)脈瘤亞組最優(yōu)多因素交互模型為由rs1333049組成的單因子模型(Testing accuracy=0.5622，P of permuta

15、tion=0.008)，十重交叉驗(yàn)證的一致率為9∶10，顯示CDKN2B-AS1在胸主動(dòng)脈真性動(dòng)脈瘤致病因素中的主導(dǎo)作用。
　　 結(jié)論:
　　 rs1333049、rs10519177、rs6045676多態(tài)性位點(diǎn)與浙江地區(qū)漢族人群胸主動(dòng)脈瘤患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，F(xiàn)BN1基因和CDKN2B-AS1基因的部分單倍體型會(huì)產(chǎn)生不同程度的遺傳易感性，F(xiàn)BN1和CDKN2B-AS1基因交互作用在胸主動(dòng)脈瘤疾病發(fā)病過(guò)程中起到重要作用。胸主動(dòng)