甘氨雙唑鈉對離體乏氧喉癌細胞放射增敏作用的實驗研究.pdf

1、前言：喉癌是頭頸部常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率占第二位，近年來有逐漸升高的趨勢，嚴重影響著人們的健康和生命。治療上，采取手術(shù)、放療、化療及生物治療的個體化綜合治療方式。對于大多數(shù)晚期的喉癌患者，常需進行輔助性放療，許多患者在放療后會出現(xiàn)如咽瘺，吞咽困難等放療副反應，甚至會出現(xiàn)放療局控失敗。喉癌是一種對放射中度敏感的腫瘤，如何提高其放射敏感性，使之既能增強局控率，又能降低對正常組織的損傷，減少副反應的發(fā)生，提高患者的生存質(zhì)量，是一個很有研究

2、價值的問題。研究表明腫瘤內(nèi)存在缺氧細胞，喉癌細胞中也含有較高比例的乏氧細胞，這些細胞具有放射抵抗性，需要比常氧細胞更高的放射劑量方能被殺滅，然而受周圍正常組織放射耐受性的限制，不能給予更高的照射劑量，因此這些乏氧的腫瘤細胞成為影響放療效果的主要原因之一。 放射增敏劑是指能提高射線對細胞，尤其是腫瘤組織中乏氧細胞的殺傷力，而對受照射的正常細胞影響不大的一些化學物質(zhì)(化學合成藥物、中草藥及其有效成分、生物制品等)。以硝基咪唑類化合物

3、為代表的親電子性化合物，能選擇性地作用于腫瘤內(nèi)的乏氧細胞，而對有氧細胞無活性，近年來被廣泛研究。甘氨雙唑鈉是我國自主研發(fā)的國家一類創(chuàng)新藥物，屬于硝基咪唑類化合物，對實體腫瘤乏氧細胞有明顯的放射增敏作用。有臨床試驗表明注射用甘氨雙唑鈉對鼻咽癌、食管癌和肺癌的放射治療有肯定的放射增敏作用。但目前尚未有專門針對喉 本研究用甘氨雙唑鈉作用于離體乏氧的喉癌細胞，觀察其對離體乏氧細胞的放射增敏作用，并探討其增敏機制，為臨床研究應用提供進一步

4、的理論依據(jù)和借鑒。 研究目的： 1.研究甘氨雙唑鈉對離體乏氧的喉癌細胞Hep—2的放射增敏作用 2.探討甘氨雙唑鈉對離體乏氧Hep—2細胞的放射增敏作用的機制 材料和方法： 喉癌細胞株Hep—2購自中南大學湘雅中心實驗室，放射增敏劑甘氨雙唑鈉(商品名希美納)由山東綠葉制藥有限公司生產(chǎn)。1.將乏氧細胞作為實驗組，常氧細胞作為對照組，在不同照射劑量下，以集落形成試驗計算集落數(shù)，擬合存活曲線，得到兩組的

5、D0值及氧增比(OER)，建立離體乏氧細胞模型。2.在離體乏氧細胞模型建立成功基礎上，設立含不同濃度(0.1mmol/L，0.5mmol/L，1.0mmol/L)甘氨雙唑鈉的乏氧細胞實驗組，及單純乏氧的對照組，然后經(jīng)不同照射劑量照射(OGy，2Gy，4Gy，8Gy，12Gy，16Gy)，利用MTT法測量OD值，初步檢測甘氨雙唑鈉的乏氧細胞放射增敏作用，再通過集落形成試驗進一步證實其對乏氧Hep—2細胞的放射增敏作用。3.流式細胞儀分析不

6、同濃度甘氨雙唑鈉作用下乏氧Hep—2細胞放射后的細胞周期變化，探討可能的放射增敏機制。 實驗數(shù)據(jù)以-x±s表示，每組實驗均重復3次，計量資料采用SPSS13.0軟件包行單因素方差分析、t檢驗及趨勢卡方檢驗，所有檢驗均以p<0.05視為有統(tǒng)計學差異。應用多靶單擊模型SF=1-(1-e—D/Do)n擬合存活曲線，并計算Do，Dq，放射增敏比以SER表示。 結(jié)果： 1.喉癌細胞Hep—2乏氧模型建立成功，常氧及乏氧組細

7、胞經(jīng)不同照射劑量照射所得存活曲線的D0值分別是：常氧狀態(tài)D0為0.71，乏氧狀態(tài)D0為1.88，氧增比OER為2.63。 2.在甘氨雙唑鈉濃度為0mmol/L，0.1mmol/L，0.5mmol/L，1.0mmol/L時，離體乏氧Hep—2細胞經(jīng)不同照射劑量作用后，測量OD值，發(fā)現(xiàn)OD值在加入增敏劑組有減小，且程度隨增敏劑濃度增加而增大。經(jīng)統(tǒng)計學分析，各組間有統(tǒng)計學差異(p<0.05)。初步判斷甘氨雙唑鈉對乏氧Hep—2細胞有放

8、射增敏作用。 3.在甘氨雙唑鈉濃度分別為0.1mmol/L，0.5mmol/L，1.0mmol/L時，乏氧Hep—2細胞經(jīng)0Gy，2Gy，4Gy，8Gy，12Gy，16Gy照射后，根據(jù)克隆(集落)形成實驗結(jié)果，應用多靶單擊模型SF=1-(1-e—D/Do)n擬合存活曲線，Do值分別為1.13，1.02，0.84，Dq值為2.60，2.30，1.54，放射增敏比SER分別為1.23，1.54，1.98?？寺?集落)形成實驗進一步證

9、明甘氨雙唑鈉對乏氧喉癌細胞Hep—2具有顯著的放射增敏作用，隨濃度增加，放射增敏作用增強。 4.乏氧照射后，隨甘氨雙唑鈉濃度增加，Hep—2細胞發(fā)生G2/M期阻滯，藥物濃度越高，G2/M期細胞阻滯比例越高，呈上升趨勢。統(tǒng)計學分析各組間有顯著性差異(p<0.05)。 結(jié)論： 1.甘氨雙唑鈉對離體乏氧喉癌細胞具有明顯的放射增敏作用，其增敏效果隨藥物濃度的增加而增強。 2.甘氨雙唑鈉對離體乏氧喉癌細胞放射增敏機