丹參素鈉對(duì)Lewis肺癌放射增敏的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:通過(guò)建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型，研究丹參素鈉在體內(nèi)是否具有放射增敏作用并探索其機(jī)制。
　　方法:首先，將Lewis肺癌細(xì)胞接種于小鼠右側(cè)大腿外側(cè)皮下建立腫瘤模型，待腫瘤長(zhǎng)至直徑0.6-0.7cm時(shí)，隨機(jī)入組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將整個(gè)實(shí)驗(yàn)分為:空白組，單純給藥組，單純放療組，放療聯(lián)合藥物組。其中單純給藥組分為單純順鉑60mg/Kg組和單純丹參素鈉60mg/Kg組;單純放療組照射劑量分別為:2Gy，4Gy，6Gy，8Gy，1

2、6Gy，24Gy，放療聯(lián)合藥物組分別為:順鉑60mg/Kg+2Gy，順鉑60mg/Kg+4Gy，順鉑60mg/Kg+6Gy，順鉑60mg/Kg+8Gy，順鉑60mg/Kg+16Gy，順鉑60mg/Kg+24Gy;丹參素鈉60mg/Kg+2Gy，丹參素鈉+4Gy，丹參素鈉60mg/Kg+6Gy，丹參素鈉60mg/Kg+8Gy,丹參素鈉60mg/Kg+16Gy,丹參素鈉60mg/Kg+24Gy;整個(gè)實(shí)驗(yàn)中順鉑作為陽(yáng)性對(duì)照。放療前半小時(shí)經(jīng)小鼠

3、腹腔單次注射丹參素鈉或順鉑，并保證各組注射的藥液體積均為0.2ml，空白對(duì)照組和單純放療組小鼠經(jīng)腹腔單次注射0.2ml滅菌注射用水。將小鼠在覺(jué)醒狀態(tài)下固定于特制固定盒內(nèi)，固定盒下墊石蠟和油紗共2.3厘米，上蓋石蠟和油紗共3.5厘米，小鼠大腿外側(cè)腫瘤排布于兩層固體水之間，放療具體方式:鈷-60低劑量照射，SSD=80cm，常規(guī)放療，小鼠右腿及腫瘤在照射野內(nèi)，其余部分在照射野外。照射后每3天測(cè)量腫瘤最大直徑及垂直徑，計(jì)算腫瘤體積，根據(jù)腫瘤體

4、積繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線，根據(jù)腫瘤生長(zhǎng)曲線繪制出劑量效應(yīng)曲線，計(jì)算SER值，判斷丹參素鈉是否具有放射增敏作用。根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)過(guò)程得出丹參素鈉在體內(nèi)具有放療增敏作用，并根據(jù)腫瘤生長(zhǎng)劑量效應(yīng)曲線，選擇單純放療、丹參素鈉聯(lián)合放療、順鉑聯(lián)合放療這三條劑量曲線相互平行時(shí)的照射劑量作為后續(xù)研究照射劑量，初步研究丹參素鈉放療增敏的機(jī)制。具體研究方法為:選擇10Gy作為照射劑量，實(shí)驗(yàn)分組為:空白組，單純放療組，丹參素鈉組，丹參素鈉聯(lián)合放療組。藥物組連續(xù)腹腔給藥

5、一周后采用上述方法對(duì)腫瘤進(jìn)行照射，照射后2小時(shí)內(nèi)，摘右眼球取血收集血清，ELISA法檢測(cè)小鼠血液中血栓素B2(TXB2)，6-酮-前列腺素(6-keto-PGF1α)，計(jì)算T/P值;并剝離腫瘤組織行免疫組化檢測(cè)腫瘤組織中HIF-1α， VEGF，CD31。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(X)±S）表示，各實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較采用單因素方差分析，各組之間實(shí)驗(yàn)結(jié)果兩兩比較采用Tamhane's T2檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)過(guò)程使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件

6、進(jìn)行。結(jié)果:1.順鉑聯(lián)合放療SER=2.538，大于1，提示順鉑具有放射增敏作用;丹參素鈉聯(lián)合放療SER=1.748，大于1，提示丹參素鈉具有放射增敏作用，但是其放射增敏作用弱于順鉑。2.免疫組化檢測(cè)結(jié)果以免疫組化定量指標(biāo)陽(yáng)性指數(shù)（即PI值）表示。a.各組HIF-1α的PI值:陰性組80.143±5.445，丹參素鈉組83.164±1.812，單純放療組50.444±1.911，丹參素鈉聯(lián)合放療組28.533±1.105。丹參素鈉組與陰

7、性組之間比較P值大于0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;單純放療組和丹參素鈉聯(lián)合放療組與陰性組比較P值小于0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;丹參素鈉聯(lián)合放療組與單純放療組比較P值小于0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;結(jié)果提示丹參素鈉能降低腫瘤組織中HIF-1α，改善腫瘤組織乏氧。b.各組VEGF的PI值:陰性組35.763±1.470，丹參素鈉組12.374±0.245，單純放療組21.192±1.002，丹參素鈉聯(lián)合放療組6.442±0.986，單純放療組、丹參素鈉

8、組和丹參素鈉聯(lián)合放療組與陰性組比較，P值均小于0.05，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;丹參素鈉組與陰性組比較，P值小于0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;丹參素鈉聯(lián)合放療組與單純放療組比較P值小于0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示丹參素鈉聯(lián)合放療能抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的生成。c.各組CD31的PI值，陰性組3.485±0.2≈6，丹參素鈉組2.500±0.193，單純放療組0.524±0.070，丹參素鈉聯(lián)合放療組0.024±0.003，丹參組、單純放療組和丹參素鈉聯(lián)

9、合放療組與陰性組比較，P值均小于0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，丹參素鈉聯(lián)合放療組與單純放療組比較，P值小于0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，間接提示丹參素鈉具有抑制血管生成的作用。3.ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果:a.各實(shí)驗(yàn)組小鼠血液中TXB2測(cè)得值:陰性組155.538±158.716pg/ml，單純放療組255.191±175.857pg/ml，丹參素鈉組221.255±164.169pg/ml，丹參素鈉聯(lián)合放療組93.160±52.354pg/ml。各實(shí)驗(yàn)

10、組與陰性組比較，P值均大于0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。丹參素鈉聯(lián)合放療組與單純放療組比較，P值小于0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示丹參素鈉聯(lián)合放療可以明顯降低放療后血液中TXB2的量，起到舒張微血管，改善微循環(huán)的作用。b.各實(shí)驗(yàn)組6-酮-前列腺素(6-keto-PGF1α)測(cè)得值:陰性組106.878±47.415pg/ml，單純放療組198.008±119.479pg/ml，丹參素鈉組68.681±35.786pg/ml，丹參素鈉聯(lián)合放療組1

11、80.148±101.752pg/ml，各實(shí)驗(yàn)組與陰性組比較，P值均大于0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。c.將TXB2的值除以6-keto-PGF1α的值計(jì)算T/P值:陰性組1.455，單純放療組1.289，丹參素鈉組3.22，丹參素鈉聯(lián)合放療組0.517。結(jié)果提示丹參素鈉聯(lián)合放療能明顯減低T/P值，改善血管收縮，改善微血管循環(huán)。結(jié)論:丹參素鈉在體內(nèi)具有放射增敏作用，但其增敏作用弱于順鉑。丹參素鈉放射增敏的機(jī)制可能為:1）抑制乏氧誘導(dǎo)因子(HI