版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:
以大麻素Ⅱ型受體(cannabinoid2 receptor, CB2R)激動劑為研究工具,研究CB2R對β-淀粉樣蛋白(β-amyloid,Aβ)誘導的小鼠學習記憶能力損傷的改善作用及其調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細胞功能表型轉(zhuǎn)化的神經(jīng)源性炎癥作用機制。為確立CB2R作為新的抗神經(jīng)源性炎癥候選藥物靶標提供進一步的實驗證據(jù),為治療阿爾茨海默病提供新的藥物治療策略。
方法:
1 CB2R激動劑對AD模型小鼠空間及非空間
2、學習記憶能力的影響
根據(jù)自發(fā)活動的研究數(shù)據(jù)將10周齡雄性C57/B16J小鼠隨機分為對照組,AD模型組,CB2R激動劑JWH-015干預組和JWH-015單藥組。對照組和JWH-015單藥組側(cè)腦室一次性注射生理鹽水8μl。AD模型組和JWH-015干預組動物側(cè)腦室一次性注射寡聚態(tài)Aβ1-424μg(8μl),以建立AD模型。造模后第2天開始,JWH-015干預組和JWH-015單藥組小鼠腹腔注射JWH-015(0.5mg/kg
3、/天),對照組和AD模型組小鼠每天腹腔注射等體積含0.1% DMSO生理鹽水,連續(xù)給藥3周。采用Morris水迷宮實驗及新物體識別實驗觀察CB2R激動劑對AD模型小鼠空間及非空間學習記憶能力的改善作用。
2 CB2R激動劑對AD模型小鼠腦內(nèi)膠質(zhì)細胞功能形態(tài)及數(shù)量的影響
通過組織免疫熒光技術(shù)觀察上述不同組別實驗動物腦內(nèi)小膠質(zhì)細胞標志物(CD11b)和星形膠質(zhì)細胞標志物(GFAP)的表達情況和CB2R激動劑對上述改變的影
4、響。
3 CB2R激動劑對Aβ誘導的小膠質(zhì)細胞功能和激活表型的影響
采用實時定量PCR技術(shù),觀察海馬、紋狀體、前額葉等腦區(qū)的CB2R,M1型激活小膠質(zhì)細胞標志物TNF-α、iNOS、IL-6及M2型激活小膠質(zhì)細胞標志物Ym1/2 mRNA的表達情況。
4 CB2R對LPS誘導的小膠質(zhì)細胞功能表型的調(diào)節(jié)機制
通過Western Blot的方法觀察CB2R對LPS誘導的激活小膠質(zhì)細胞內(nèi)絲裂原活化蛋白激
5、酶信號通路ERK、JNK及p38 MAPK磷酸化水平的影響,探討CB2R參與小膠質(zhì)細胞激活功能表型調(diào)節(jié)的信號傳導機制。
結(jié)果:
1 CB2R激動劑改善AD模型小鼠空間和非空間學習記憶能力
Morris水迷宮實驗結(jié)果顯示,在定位航行實驗中,AD模型組小鼠逃避潛伏期較對照組小鼠顯著延長(P<0.01);在空間探索實驗中,與對照組相比,AD模型組小鼠1分鐘穿越平臺次數(shù)顯著減少(P<0.05);新物體識別實驗結(jié)果顯
6、示,與對照組相比,AD模型組小鼠新物體識別指數(shù)顯著下降(P<0.05),提示AD模型建立成功。與AD模型組小鼠相比,JWH-015干預組小鼠逃避潛伏期顯著縮短(P<0.05),1分鐘穿越平臺次數(shù)顯著增加(P<0.05); JWH-015干預組小鼠新物體識別指數(shù)較AD模型組小鼠相比顯著增加(P<0.05),提示CB2R激動劑能夠改善AD模型小鼠空間及非空間學習記憶能力;JWH-015單藥組小鼠與對照組相比,逃避潛伏期、1分鐘穿越平臺次數(shù)及
7、新物體識別指數(shù)均無顯著變化(P>0.05);此外,各組小鼠體重及自發(fā)活動未見組間差異,提示JWH-015不影響正常小鼠體重及精神活動。
2 CB2R激動劑抑制腦內(nèi)膠質(zhì)細胞激活數(shù)量
通過免疫組化的方法檢測不同處理組小鼠紋狀體腦區(qū)小膠質(zhì)細胞和海馬腦區(qū)星型膠質(zhì)細胞的激活與表達情況。與對照組相比,AD模型組小鼠紋狀體腦區(qū)小膠質(zhì)細胞標記物CD11b表達明顯增高,形態(tài)表現(xiàn)為分枝狀(激活狀態(tài));JWH-015干預組小鼠紋狀體腦區(qū)C
8、D11b的表達與AD模型組相比明顯下降;JWH-015單藥組較對照組未見明顯差異。AD模型組小鼠海馬腦區(qū)星型膠質(zhì)細胞標志物GFAP較對照組表達顯著增高;JWH-015干預組小鼠GFAP的表達水平較AD模型組有減少的趨勢;JWH-015單藥組與對照組相比沒有明顯差異。
3 CB2R調(diào)節(jié)腦內(nèi)Aβ誘導的小膠質(zhì)細胞M1/M2激活表型的轉(zhuǎn)化
3.1 Aβ誘導腦內(nèi)不同腦區(qū)CB2RmRNA表達水平上調(diào)
與對照組相比,AD
9、模型組小鼠海馬、紋狀體和前額葉等腦區(qū)CB2RmRNA表達均顯著上調(diào)(海馬P<0.01,紋狀體和前額葉P<0.05)。與AD模型組相比,JWH-015干預組小鼠海馬、紋狀體和前額葉等腦區(qū)CB2RmRNA表達水平均顯著下調(diào)(海馬P<0.01,紋狀體和前額葉P<0.05)。
3.2 CB2R激動劑降低M1型激活小膠質(zhì)細胞標記物mRNA表達水平
在海馬腦區(qū),與對照組小鼠相比,AD模型組小鼠iNOS mRNA表達水平顯著上調(diào)(
10、P<0.01)。與AD模型組相比,CB2R激動劑干預組小鼠iNOSmRNA表達水平顯著下調(diào)(P<0.01)。模型組IL-6,TNF-α mRNA表達呈上調(diào)趨勢,JWH-015干預組IL-6,TNF-α mRNA表達呈下調(diào)趨勢。單藥組與對照組相比,其TNF-α、iNOS、IL-6 mRNA表達未見明顯改變(P>0.05)。
在紋狀體腦區(qū),AD模型組小鼠腦內(nèi)iNOS,IL-6,TNF-α mRNA表達較對照組均顯著升高(P值分別為
11、P<0.01、P<0.01和P<0.05)。與模型組相比,JWH-015干預組小鼠腦內(nèi)iNOS,IL-6,TNF-α mRNA的表達顯著下調(diào)(分別為P<0.01、P<0.01和P<0.05)。與對照組相比,單藥組TNF-α、iNOS、IL-6 mRNA表達無顯著差異(P>0.05)。
在前額葉腦區(qū),與對照組相比,AD模型組小鼠腦內(nèi)iNOS,IL-6 mRNA表達顯著上調(diào)(P值分別為P<0.01,P<0.05)。與AD模型組相比
12、,JWH-015干預組小鼠腦內(nèi)iNOS,IL-6 mRNA表達顯著下調(diào)(P均<0.01)。TNF-α mRNA表達各組間未見顯著改變(P>0.05)。
上述實驗結(jié)果表明,CB2R激動劑JWH-015通過激活CB2R可下調(diào)AD模型小鼠腦內(nèi)M1型激活小膠質(zhì)細胞數(shù)量及其促炎癥功能。
3.3 CB2R激動劑上調(diào)M2型激活小膠質(zhì)細胞標記物mRNA表達
在海馬腦區(qū),與對照組小鼠相比,AD模型組小鼠腦內(nèi)M2型激活小膠質(zhì)細
13、胞標記物Ym1/2mRNA表達顯著下調(diào)(P<0.05)。與AD模型組相比,JWH-015干預組小鼠腦內(nèi)Ym1/2 mRNA表達水平顯著上調(diào)(P<0.05)。
在紋狀體腦區(qū),與對照組小鼠相比,AD模型組小鼠腦內(nèi)Ym1/2mRNA表達水平顯著下調(diào)(P<0.05),JWH-015干預組小鼠腦內(nèi)Ym1/2mRNA表達水平呈升高趨勢,統(tǒng)計學沒有顯著差異(P>0.05)。
在前額葉腦區(qū),AD模型組小鼠腦內(nèi)Ym1/2 mRNA表達
14、水平較對照組顯著下調(diào)(P<0.05)。與AD模型組相比,JWH-015干預組小鼠腦內(nèi)Ym1/2mRNA表達水平顯著上調(diào)(P<0.01)。JWH-015單藥處理組Ym1/2 mRNA表達水平較對照組無顯著差異(P>0.05)。
上述實驗結(jié)果表明,CB2R激動劑JWH-015可上調(diào)AD模型小鼠腦內(nèi)M2型激活小膠質(zhì)細胞表達及其抗炎作用。
4 CB2R激動劑顯著抑制LPS誘導的M1型BV-2小膠質(zhì)細胞ERK1/2和JNK磷酸
15、化水平
與對照組相比,LPS處理組BV-2小膠質(zhì)細胞ERK磷酸化水平顯著增高(P<0.01);JWH-015低劑量處理組(10 nM)與LPS處理組相比,ERK1/2磷酸化水平呈下降趨勢;JWH-015中劑量(100 nM)及高劑量組(1μM)BV-2小膠質(zhì)細胞ERK1/2磷酸化水平顯著下調(diào)(P<0.01);JWH-015中濃度(100 nM)組對LPS誘導的BV-2小膠質(zhì)細胞ERK1/2磷酸化水平升高的抑制作用可被CB2R拮
16、抗劑SR144528所顯著阻斷(P<0.05)。
與對照組相比,LPS處理組BV-2小膠質(zhì)細胞內(nèi)JNK磷酸化水平顯著增高(P<0.05);JWH-015能濃度依賴性地抑制LPS誘導BV-2小膠質(zhì)細胞的JNK磷酸化水平;JWH-015中濃度(100 nM)組對LPS誘導的BV-2小膠質(zhì)細胞JNK磷酸化水平升高的抑制作用可部分被CB2R拮抗劑SR144528阻斷。
實驗結(jié)果提示,CB2R激活后,下調(diào)ERK和JNK兩個信號
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 大麻素Ⅱ型受體調(diào)節(jié)阿爾茨海默病樣小鼠學習記憶能力的神經(jīng)源性炎癥機制研究.pdf
- 脂聯(lián)素改善三轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病模型小鼠學習記憶能力損傷的神經(jīng)保護作用及機制研究.pdf
- 冬凌草甲素改善阿爾茨海默病模型小鼠認知功能及機制研究.pdf
- β-石竹烯對阿爾茨海默病模型小鼠學習記憶的影響及其機制研究.pdf
- 柚皮素通過影響氧化應激改善阿爾茨海默病模型大鼠的學習記憶能力.pdf
- 阿爾茨海默病
- 阿爾茨默海病
- 阿爾茨海默病
- 阿爾茨海默病
- 自主跑輪運動通過抑制NF-κB通路改善阿爾茨海默病模型小鼠學習記憶能力.pdf
- GLP-1-GIP-Gcg三受體激動劑對阿爾茨海默病小鼠認知行為和腦病理特征的影響及其機制研究.pdf
- 一種抑制Aβ聚集的小分子天然藥物改善阿爾茨海默病小鼠學習記憶能力的實驗研究.pdf
- 硫化氫減輕阿爾茨海默病小鼠學習記憶減退作用及機制研究.pdf
- 五味子酮改善阿爾茨海默病樣大鼠學習記憶功能及相關(guān)機制的研究.pdf
- 電針對阿爾茨海默病大鼠學習記憶能力及神經(jīng)營養(yǎng)因子影響的研究.pdf
- ?;撬釋Π柎暮D∧P痛笫髮W習記憶能力的影響.pdf
- 阿爾茨海默病之謎
- 新編阿爾茨海默病
- 六味地黃活性部位對阿爾茨海默病模型小鼠學習記憶能力的影響及其機制研究.pdf
- 阿爾茨海默病簡介
評論
0/150
提交評論