Attractin在不育癥男性中的差異性表達(dá)意義與影響生育機(jī)制的初步探討.pdf

1、文章主要從以下幾部分進(jìn)行了論述。
　　第一部分Attractin在不育癥男性睪丸組織中的表達(dá)差異。
　　目的：通過對生育正常與不育癥男性患者睪丸組織中Attractin定位與定量表達(dá)差異的研究，來探討Attractin與男性生殖的關(guān)系。
　　方法：對生育正常與少弱精子癥、原發(fā)性非梗阻性無精子癥兩組不育癥男性睪丸組織病理切片分別進(jìn)行HE染色、免疫組化法(SP)和免疫熒光檢查，觀察Attractin蛋白在三組男性睪丸組織中

2、的表達(dá)。同時(shí)采用逆轉(zhuǎn)錄-熒光定量PCR(Q-PCR)檢測三組男性睪丸組織Attractin mRNA及其同系物Attractin like-1 mRNA的表達(dá)差異；Western blot的方法檢測Attractin蛋白水平的表達(dá)差異。
　　結(jié)果：免疫組化與免疫熒光結(jié)果顯示三組男性睪丸組織內(nèi)均廣泛存在Attractin的表達(dá),主要表達(dá)于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，且胞膜表達(dá)強(qiáng)于胞質(zhì)；Leydig細(xì)胞、Sertoli細(xì)胞、精原細(xì)胞、精母細(xì)胞及精

3、子細(xì)胞均為陽性表達(dá)。Q-PCR結(jié)果顯示生育正常組男性睪丸組織的Attractin mRNA和Attractin like-1 mRNA表達(dá)量最高，少弱精子癥組表達(dá)降低，原發(fā)性非梗阻性無精子癥組表達(dá)最低，三組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Western blot的結(jié)果也顯示Attractin蛋白在生育正常組表達(dá)高，少弱精子癥組表達(dá)降低，而原發(fā)性非梗阻性無精子癥組表達(dá)最低，三組間比較差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：Attractin蛋

4、白在人類睪丸組織中廣泛表達(dá)，其在不育癥男性睪丸組織中基因水平與蛋白水平的表達(dá)均存在差異，具體作用環(huán)節(jié)尚有待進(jìn)一步研究。
　　第二部分Attractin在不育癥男性精液中的含量差異。
　　目的：檢測Attractin在人類精液中是否存在，并比較其在精液參數(shù)正常組與少弱精子癥組、無精子癥組精液中的含量差異，進(jìn)一步探討Attractin與男性生殖的關(guān)系。
　　方法：不育癥男性精液液化后部分進(jìn)行常規(guī)精液分析，按照WHO人類精液

5、檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊（第四版）標(biāo)準(zhǔn)分為精液參數(shù)正常組、少弱精子癥組與無精子癥組；其余部分精液離心處理后分離為精漿（SP）和精子提取物（SE），應(yīng)用Western blot的方法檢測Attractin蛋白在精漿與精子提取物中的含量，并比較Attractin蛋白在精液參數(shù)正常組、少弱精子癥組與無精子癥組三組精漿中的含量差異；Attractin在精液參數(shù)正常組與少弱精子癥組精子提取物中中的含量差異；以及采用逆轉(zhuǎn)錄-熒光定量PCR（Q-PCR）

6、的方法比較Attractin mRNA、Attractin like-1 mRNA的表達(dá)差異。
　　結(jié)果：Attractin蛋白在精漿中含量高，在精子提取物中含量低。Attractin蛋白在三組精漿中的含量表現(xiàn)為精液參數(shù)正常組含量最高，少弱精子癥組含量低，無精子癥組中含量最低，三組差異均有顯著性；Attractin蛋白在精子提取物中的含量也表現(xiàn)為精液參數(shù)正常組含量高，少弱精子癥組含量低，差異也具有顯著性；Q-PCR結(jié)果顯示Attr

7、actin mRNA在精液參數(shù)正常組精子提取物中表達(dá)量明顯較高，少弱精子癥組低，但差異不具有顯著性，而Attractin like-1 mRNA也表現(xiàn)為在精液參數(shù)正常組精子提取物中表達(dá)量明顯較高，少弱精子癥組低，且結(jié)果有顯著性差異。
　　結(jié)論：Attractin在男性精漿中含量高，在精子提取物中含量低，其蛋白含量與mRNA的表達(dá)水平都與精液質(zhì)量參數(shù)相關(guān)。
　　第三部分Attractin影響男性生殖的機(jī)制的初步研究。
　

8、　目的：通過對不育癥男性Attractin表達(dá)與睪丸組織中細(xì)胞凋亡、精漿中細(xì)胞因子的變化關(guān)系，對Attractin影響男性生殖的機(jī)制作初步探討。
　　方法：對不育癥男性睪丸組織病理切片TUNNEL法測細(xì)胞凋亡水平，Western blot的方法檢測睪丸組織中凋亡相關(guān)因子Caspase2、3、6、Bcl-2、FAS、抗氧化酶SOD1的表達(dá)水平變化，并與Attractin的表達(dá)變化趨勢比較是否一致；用Western blot測不育癥男

9、性精漿Attractin的含量，ELISA方法測不育癥男性精漿中IL-2;IL-6;TNF-α的濃度，并比較細(xì)胞因子含量變化與Attractin濃度變化是否一致。
　　結(jié)果：男性睪丸組織中凋亡相關(guān)因子Caspase2、3、6、FAS在生育正常組表達(dá)低，少弱精子癥組表達(dá)較高，而原發(fā)性非梗阻性無精子癥組最高，與Attractin的表達(dá)趨勢相反；而凋亡抑制因子Bcl-2和超氧化物歧化酶SOD1均為在生育正常組表達(dá)高，少弱精子癥組表達(dá)較低

10、，原發(fā)性非梗阻性無精子癥組最低，與Attractin的表達(dá)趨勢相同。精漿中細(xì)胞因子濃度變化趨勢與Attractin的含量不同，Attractin在精液參數(shù)正常組精漿中含量最高，少弱精子癥組較低，無精子癥組最低，三組間差異均有顯著性；而細(xì)胞因子IL-2在少弱精子癥組含量最高，在精液參數(shù)正常組與無精子癥組精漿中含量無差異；IL-6，TNF-a在精液參數(shù)正常組含量最低，與少弱精子癥組和無精子癥組相比差異均有顯著性，而在無精子癥組與少弱精子癥組