豬肉及產(chǎn)品中5種致病菌檢測芯片的保存和靈敏度研究.pdf

1、生物芯片是指包被在硅片、尼龍膜等固相支持物上的高密度的組織、細胞、蛋白質、核酸、糖類以及其它生物組分的微點陣，芯片與標記的樣品進行雜交，通過檢測雜交信號即可實現(xiàn)對生物樣品的分析。生物芯片技術，被喻為21世紀生命科學的支撐技術，不僅用于細菌鑒定，在檢測基因的表達，研究生物體對逆境的反應，研究生物體對光線的反應、環(huán)境檢測、發(fā)現(xiàn)新基因等各個領域也有著廣闊的應用前景。尤其是在動物產(chǎn)品的微生物檢驗中的應用越來越廣泛。本文對進出口豬肉及其產(chǎn)品中沙門

2、氏菌、單增李斯特氏菌、金黃色葡萄球菌、空腸彎曲菌和大腸桿菌O157：H7檢測試劑盒芯片進行了保存試驗和靈敏度試驗，為進出口豬肉及其產(chǎn)品中此五種致病菌快速檢測的生物芯片應用條件和有效期提供科學依據(jù)。 根據(jù)保存試驗設計，本試驗選取微生物檢測試劑盒芯片裸露放置于37℃環(huán)境中，用試劑盒所能檢測出的五種致病菌(大腸桿菌O157：H7、李斯特氏菌、沙門氏菌、空腸彎曲桿菌、金黃色葡萄球菌)對芯片進行穩(wěn)定性檢測試驗。從零天起，每天取37℃保存的

3、芯片抽真空放于4℃保存，至第七天將所有4℃保存芯片取出，參照試劑盒說明，分別對五種致病菌進行基因組DNA提取、PCR擴增、PCR產(chǎn)物凝膠電泳，并將五種菌的PCR產(chǎn)物混合后與上述保存芯片進行雜交，42℃恒溫水浴雜交2小時，洗片后，芯片用晶芯(R)食源性致病微生物檢測分析系統(tǒng)進行掃描判讀。試驗共進行7天，相當于20℃下芯片保存10.5個月。試驗結果顯示，所有五種菌的檢測值與檢測限之間均存在顯著性差異，且信號強度大于檢測限，檢測結果均為陽性。

4、證明該微生物檢測試劑盒芯片能在37℃下穩(wěn)定保存7天，也就是說即在4℃條件下保持其穩(wěn)定性及活性的時間可達到10.5個月以上。 根據(jù)靈敏度試驗設計，采用人工培養(yǎng)的細菌進行檢測試驗，選取金黃色葡萄球菌、大腸桿菌O157：H7、沙門氏菌、李斯特氏菌和空腸彎曲桿菌，在通用培養(yǎng)基營養(yǎng)肉湯中接種，過夜培養(yǎng)16h，次日取菌液進行濃度測定，定量后的菌液取一定量提取基因組DNA，對基因組DNA進行定量檢測，分別取5ng、2.5ng、1ng、0.5n