豬偽狂犬病病毒和三種主要致病菌的基因芯片檢測技術(shù)研究.pdf

1、隨著分子生物學技術(shù)發(fā)展,許多分子生物學方法在動物疾病的診斷中得到了應用?；蛐酒夹g(shù)作為一項高新技術(shù),在面積不大的載體上如玻片上可實現(xiàn)對多種目的基因的同時檢測。它是基于PCR技術(shù)和核酸雜交的原理,事先對載體表面進行特定處理,將寡核苷酸片段或cDNA片段有序地、高密度地排列于固相載體上,形成DNA微陣列,用高精密度的激光共聚焦熒光檢測系統(tǒng)進行雜交信號的檢測。其優(yōu)點為高通量、并行性、微型化、自動化、準確快速、多功能及防止污染從而有效排除外界

2、干擾。目前國內(nèi)外有許多學者都在從事基因芯片的研究工作,基因芯片技術(shù)無疑為動物疾病診斷和微生物檢測提供了一項有效快速的檢測技術(shù)。本試驗嘗試性地制備了用于檢測豬偽狂犬病病毒和三種主要致病菌的基因芯片。
　　 偽狂犬病病毒(PRV)是引起豬繁殖障礙的主要病原體之一,這種疾病給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失,常規(guī)的病因?qū)W實驗室診斷方法大多耗時長、敏感性低和需要較復雜的操作技術(shù)。本研究在分析豬偽狂犬病毒基因組結(jié)構(gòu)特征的基礎(chǔ)上,研究了PRV檢測

3、基因芯片靶基因和用于檢測PRV的探針、芯片的雜交溫度和時間等；將gE基因作為目的基因,并根據(jù)其基因設(shè)計引物與探針,采用不對稱PCR技術(shù)擴增目的基因,將探針固定在表面經(jīng)過醛基化處理過的芯片上來檢測豬偽狂犬病病毒,構(gòu)建了PRV病原檢測基因芯片,達到了對豬偽狂犬病病毒檢測的目的。
　　 臨床上常用的病原微生物診斷方法有培養(yǎng)技術(shù)、免疫學技術(shù)和PCR技術(shù)等。這些技術(shù)在臨床診斷中發(fā)揮了巨大的作用,但仍存在一些缺點。如培養(yǎng)技術(shù)繁瑣而費時,免疫

4、技術(shù)要有特異的血清等；快速檢測致病菌能夠及時有效地預防、治療和控制致病菌的傳染。為了探索一種準確快速的檢測方法,本試驗嘗試將基因芯片技術(shù)應用到致病菌檢測領(lǐng)域,利用原核生物16SrRNA基因保守性兼變異性的特點,設(shè)計篩選了1對通用引物,在其保守區(qū)設(shè)計通用引物,在其變異區(qū)設(shè)計探針,實現(xiàn)多病原菌的檢測,真正的實現(xiàn)高通量檢測,在相同的條件下對沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌進行檢測,達到了對細菌進行檢測鑒定的目的,制備的基因芯片能夠同時檢測沙