呼吸道常見(jiàn)致病菌基因芯片檢測(cè)方法的研究.pdf

1、呼吸道感染在人體感染性疾病當(dāng)中所占比例最多，嚴(yán)重威脅人類(lèi)的生命健康。隨著人類(lèi)社會(huì)的發(fā)展，全球變暖、環(huán)境污染以及抗生素的廣泛使用加劇了微生物的變異性，致使新的致病菌不斷出現(xiàn)，同時(shí)也引起人類(lèi)對(duì)呼吸道疾病的極大關(guān)注。呼吸道疾病多為細(xì)菌性感染。如果在發(fā)病早期能夠快速有效地檢測(cè)病原菌的種類(lèi)，為后期的合理用藥提供可靠的指導(dǎo)，則能夠大大降低呼吸道疾病的死亡率。因此，建立快速、高效的檢測(cè)體系是非常必要的。
　　 本項(xiàng)目針對(duì)13種呼吸道常見(jiàn)致病菌

2、大腸桿菌，嗜麥芽糖寡養(yǎng)單胞菌，陰溝腸桿菌，表皮葡萄球菌，溶血葡萄球菌，銅綠假單胞菌，肺炎克雷伯菌，鮑曼不動(dòng)桿菌，嗜肺軍團(tuán)菌，流感嗜血桿菌，肺炎鏈球菌，金黃色葡萄球菌，卡他莫拉菌，選取特異性基因如16S rRNA基因、ITS間區(qū)序列、gyrB基因、copB基因等，設(shè)計(jì)了6對(duì)引物和41條探針，此外用檢測(cè)范圍內(nèi)的菌株、近緣菌株、臨床分離株總共90株菌對(duì)探針進(jìn)行篩選，最終得到了能快速檢測(cè)上述13種菌的基因芯片。該芯片的在基因組水平上的檢測(cè)的靈敏

3、度為1ng/μl;在進(jìn)行模擬樣品試驗(yàn)時(shí)，其檢測(cè)的靈敏度達(dá)到103 cfu/ml。此次研究利用了多重PCR、兩步PCR方法對(duì)特異性片段進(jìn)行擴(kuò)增與標(biāo)記，建立了針對(duì)6對(duì)引物的多重PCR體系。另外，還優(yōu)化了雜交條件，最終確定雜交溫度為46度、雜交時(shí)間為16小時(shí)，能夠得到較好的熒光信號(hào)。
　　 總之，與傳統(tǒng)的方法相比基因芯片靈敏度高、特異性強(qiáng)、通量大、周期短，能夠快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)病原菌的種類(lèi)，可以應(yīng)用于微生物學(xué)研究、臨床診斷和流行病調(diào)查等