豬的六種常見(jiàn)致病菌基因芯片檢測(cè)技術(shù)的研究.pdf

1、細(xì)菌病在我國(guó)不同規(guī)模的養(yǎng)豬場(chǎng)常年不斷發(fā)生，特別是病毒病在豬群中流行時(shí)，細(xì)菌病往往都會(huì)出現(xiàn)，出現(xiàn)混合感染或繼發(fā)感染，致使豬群的發(fā)病率和死亡率都有很大程度提高，給我國(guó)的養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。當(dāng)前，免疫抑制性疾病在豬群中普遍存在，致病菌新的血清型不斷出現(xiàn)，抗生素濫用造成細(xì)菌耐藥性不斷提高，甚至出現(xiàn)超級(jí)細(xì)菌，而且豬場(chǎng)和社會(huì)的生物安全措施不健全、不到位，這些不利的情況給我國(guó)豬病的治療和防控工作帶來(lái)很大的困難。通過(guò)對(duì)規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)送檢的病料進(jìn)行細(xì)

2、菌學(xué)分離鑒定，發(fā)現(xiàn)細(xì)菌分離的陽(yáng)性率高達(dá)82％。分離的細(xì)菌主要有鏈球菌、副豬嗜血桿菌、大腸桿菌、肺炎支原體、多殺性巴氏桿菌、傳染性胸膜肺炎放線桿菌、沙門(mén)氏菌和附紅細(xì)胞體等。因此，為了我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展，在重視對(duì)豬的病毒性疾病防控的同時(shí)，我們一定也要加強(qiáng)對(duì)細(xì)菌性疾病的預(yù)防和治療，以確保豬只的健康生長(zhǎng)，而對(duì)細(xì)菌有效的鑒定是重要前提。
　　臨床上鑒定病原菌常用的方法有分離培養(yǎng)技術(shù)、免疫學(xué)技術(shù)和PCR技術(shù)等，這些方法雖然都非常有效，但是各

3、有缺點(diǎn)。基因芯片技術(shù)的出現(xiàn)，為致病菌的鑒定開(kāi)辟了新的道路，它是分子生物技術(shù)與微電子技術(shù)融合的結(jié)晶，將大量已知的核苷酸序列固定于固相載體表面，通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則與標(biāo)記的靶基因雜交，再對(duì)雜交信號(hào)進(jìn)行掃描分析，可快速、準(zhǔn)確的對(duì)致病菌作出鑒定。由于其微量、快速、準(zhǔn)確、高通量等的優(yōu)點(diǎn)，定會(huì)成為新一代的自動(dòng)化疫病檢測(cè)工具。
　　以多殺性巴氏桿菌、豬大腸桿菌、胸膜肺炎放線桿菌、副豬嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌、豬鏈球菌6種豬常見(jiàn)致病菌為目標(biāo)細(xì)菌，

4、16-23S rRNA基因?yàn)榘谢?，從GenBank中下載它們16S rDNA、16-23S rDNA、23S rDNA的全序列，在16-23S rDNA的變異區(qū)設(shè)計(jì)針對(duì)6種細(xì)菌的特異性探針，在16S rDNA、23S rDNA的保守區(qū)設(shè)計(jì)通用引物。通過(guò)序列分析、靶標(biāo)與探針雜交試驗(yàn)、雜交條件優(yōu)化試驗(yàn)建立了由6條寡核苷酸探針和1對(duì)通用引物構(gòu)成的豬常見(jiàn)致病菌基因芯片的檢測(cè)方法。用參考菌株全基因組作為模板做PCR得到靶標(biāo)，通過(guò)每種靶標(biāo)與相應(yīng)探