載脂蛋白A-I在機體急性相反應(yīng)中對中性粒細胞功能的調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、窖76988後里大學(xué)博士學(xué)位論文掌棱代璃t10246學(xué)號le11103615艄蛋白AI樅急槲嘞沖舯嫩她功能的調(diào)節(jié)作用研究院系：專監(jiān)：娥名：指導(dǎo)教師：完成日期：藥學(xué)院生物純學(xué)與分子生物學(xué)廖雪玲吳滿平教授2004年6月駕蔑幫宓壘j℃泰器1疊——～!墅蹩黻壁塑壁翌贍黧型壁!!壘：!嬰!黧!!圣壁窶蝥慧￡塑堡活劑，研究apoAI對不同狀態(tài)PMN功能的影響：1)靜息PMNapoAI(終濃度分聯(lián)為0t2。5，5，10BglmL)，2)fMLP激活斡

2、PMNapoA1(終濃度分澍失0，25，5，1099／mL)，以及3)PMA激活的PMN十a(chǎn)poA。I(終濃度分別為0，25，5，1099／mL)。分別測定以下PMN功能：1)粘附試驗，觀察apoAI對fMLP和PMA激潺戇PMN在紓維鹋連蛋自(fibronectin)裘瑟蕤瓣數(shù)影豌；2)02。耬媧曉測定(呼吸爆發(fā)功能試驗)，觀察apoA_I對fMLP和PMA激滿的PMN產(chǎn)生超氧化物的作用；3)脫顆粒試驗，測定PMN釋放到細胞外的髓過氧

3、化物酶(Myeloperoxidase，MPO)以及彈瞧爨騫酶(elastase)茨活牲，磷究apoA—l瑟fMLP和PMA激活的PMN顙粒釋放功能的影響4)L，929細胞殺傷實驗，測定PMN各種釋放物(包括細胞因子、水解酶等)對L929細胞的殺傷率，研究apoAI對fMLP秘PMA激疆懿PMN器敷殺銹瞧耨凄(黷糖趣氧純攜、多耱表簿穩(wěn)以及瓣瘤壞死因子(tumornecrosisfactor疵，n盯a)等炎癥細胞因子(cytokine，C

4、K))引起組織損傷的影響。本實驗獲褥懿下絡(luò)采：一、HDL在LPS誘導(dǎo)的APR中組成成分發(fā)擻急劇的變化，包括：①形成頹粒半徑tE較小的HDL；④大約10％的apoA1被一種相對分子質(zhì)爨約為13000的蛋白置換密來，apoIIDL於含量夔著APR鶼發(fā)震降低(產(chǎn)o05)：③rngL耱黼醇含量顯著降低，同時三酰甘油含量顯鬻升高(Jp001)；④三酰甘油成為HDL的主要脂質(zhì)成分。二、apoAI在不影響靜息PMN功能懿清澈下，顯著毽下調(diào)fMLP和P

5、MA激活的PMN的功能，apoA—I對fMLP激活的PMN功能的抑制強于對PMA激活的PMN功能的抑制(Po0I)。(1)粘附功能，結(jié)晶紫染色駐示激活的PMN在fibronectin表面貔精辯可被apoA1顯著往捧翻(P固01)，莠疆a(chǎn)poAI辯fMLP激活的PMN的抑制作用存在劑量效應(yīng)關(guān)系(P《O05，P001，p001)；(2)活性氧化代謝物的生成(即PMN的呼吸爆發(fā)功能)，以NBT還原試驗定量測定02一，高香草簸熒光分競走澄法定蠢