水基磁流體聯合融合蛋白RGD-tTF雙靶向誘發(fā)腫瘤組織血管栓塞.pdf

1、利用靶向性血栓藥物實現對實體瘤血管的選擇性栓塞是一種新穎的抗腫瘤策略。該策略以截短的組織因子(truncatedTissueFactor，tTF；也稱前凝血因子)為效應因子，結合腫瘤血管靶向載體實現選擇性誘發(fā)腫瘤組織血管栓塞，阻斷腫瘤營養(yǎng)物質和氧氣的供給，引發(fā)腫瘤缺血性壞死，達到抗腫瘤作用。目前的研究多采用單載體結合單效應因子的形式，存在著載體結合力不足(單價結合)、載體藥物負荷低、效應因子在靶位富集速度慢和濃度不足等問題，其療效并不理

2、想。為克服上述問題和提高該策略的抗腫瘤效果，本文首次利用水基磁流體為基體制備新型的納米磁控血栓藥物，以獲得藥物載體的多價結合、高容量攜帶、雙靶向(載體生物靶向與水基磁流體的磁性物理靶向)治療等特性。 為驗證該設想的可行性，我們以FeCl3·6H2O為鐵源，NaOH為堿，利用改良后的化學共沉淀法制備MnFe2O4粒子，在制備過程中加入乙酸和表面活性劑檸檬酸修飾MnFe2O4粒子，制得以PBS為載液的MnFe2O4水基磁流體；利用H

3、—600透射電鏡觀測其納米粒徑，以超導量子干涉磁強儀(SQUID)鑒定磁性，并以MTT和LDH比色法檢測其細胞毒性；將RGD—tTF融合蛋白與水基磁流體結合后，通過一系列體外實驗檢測結合后RGD—tTF的整體活性；并在小鼠腫瘤模型中檢測RGD—tTF水基磁流體(RGD—tTF—MnFe2O4)的靶向定位及腫瘤血管栓塞效果。結果表明，成功制備出的納米粒子呈橢圓或圓形，粒徑尺寸集中在10-25nm之間，呈超順磁性并具磁流變現象，且該水基磁流

4、體能穩(wěn)定保存；凝血實驗和凝血因子X(FX)活化實驗證實本室重組的RGD—tTF融合蛋白與磁流體結合后仍保留tTF部分活化FX，引發(fā)血液凝固的的活性：流式細胞儀檢測表明，與磁流體的結合對RGD—tTF在內皮細胞表面結合率無明顯影響，并證實在磁場的作用下能實現水基磁流體對RGD—tTF的體外細胞定位作用。在小鼠肝癌H22模型的體內實驗中，組織學觀察發(fā)現RGD—tTF—MnFe2O4和單純的RGD—tTF均能選擇性定位于腫瘤組織，并特異性誘發(fā)