芪仙安腸方對(duì)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的治療作用及機(jī)理研究.pdf

1、目的和意義：潰瘍性結(jié)腸炎是一種病因尚未完全闡明的慢性炎癥性腸病，臨床主要表現(xiàn)腹瀉、粘液膿血便、腹痛和里急后重，有的還伴有關(guān)節(jié)、皮膚、眼、口及肝膽等腸外表現(xiàn)，常纏綿難愈，多反復(fù)發(fā)作，且與結(jié)腸癌的關(guān)系密切。近年來(lái)，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)有關(guān)發(fā)病的免疫學(xué)機(jī)制受到廣泛關(guān)注，并取得較大進(jìn)展，但是尚缺乏療效顯著、副作用小的治療藥物。中醫(yī)藥防治本病有悠久的歷史和豐富的經(jīng)驗(yàn)，值得我們總結(jié)和研究。通過(guò)對(duì)歷代中醫(yī)文獻(xiàn)研究和分析，結(jié)合導(dǎo)師整體學(xué)術(shù)思想，我們認(rèn)為，本病應(yīng)歸屬

2、“泄瀉”“痢疾”的范疇，其病因有外感、飲食、情志等不同，臨證又有寒、熱、虛、實(shí)之別，但始終存在著脾失健運(yùn)，濕熱蘊(yùn)結(jié)，濁毒內(nèi)生，氣滯血瘀的病機(jī)變化.脾氣虛弱為發(fā)病之本，濕熱濁毒為致病之標(biāo)，而血瘀阻絡(luò)貫穿疾病始終，內(nèi)瘍形成是其必然結(jié)果。從而確立了益氣健脾、清熱利濕、化瘀解毒、生肌斂瘡的治療大法，并根據(jù)導(dǎo)師多年臨床經(jīng)驗(yàn)，篩選出固定方藥芪仙安腸方.我們采用芪仙安腸方治療UC取得良好效果。本課題在理論研究的基礎(chǔ)上，建立了大鼠UC模型，在觀察芪仙安

3、腸方對(duì)UC治療作用的同時(shí)，特別是通過(guò)觀察其對(duì)大鼠氧自由基、免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞因子、細(xì)胞粘附分子、核因子κB、巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子等的影響，從分子生物學(xué)角度探討芪仙安腸方可能的作用機(jī)制，為中醫(yī)藥治療UC提供一定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　 方法：健康雄性SD大鼠48只，隨機(jī)分為正常組、模型組、芪仙安腸方大劑量組、芪仙安腸方中劑量組、芪仙安腸方小劑量組、柳氮磺胺吡啶(SASP)組.采用三硝基苯磺耐乙醇溶液灌腸法造模。造模后第3天分別對(duì)各組

4、大鼠給予芪仙安腸方(大、中、小劑量)、SASP及生理鹽水灌胃，每日一次，連續(xù)兩周.每日觀察大鼠一般狀態(tài)，評(píng)估疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)，第18天處死大鼠，采集血液及結(jié)腸組織標(biāo)本.分別觀察UC大鼠結(jié)腸粘膜損傷情況、結(jié)腸組織的病理形態(tài)學(xué)改變、結(jié)腸組織髓過(guò)氧化物酶(MPO)、超氧化物岐化酶(SOD)，丙二醛(MDA)、T細(xì)胞亞群、血清免疫球蛋白(Ig)、血清IL-2、IL-4、腫瘤壞死因子(TNF-α)、細(xì)胞粘附分子(ICAM-1)、核因子κB(

5、NF-κB)、巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)mRA的變化。
　　 結(jié)果：模型組大鼠一般狀態(tài)欠佳，精神萎靡，懶于活動(dòng)，被毛松散無(wú)澤，拱背，食量下降，拉稀便或粘液血便，形態(tài)消瘦，體重下降；DAI、結(jié)腸粘膜損傷指數(shù)(CMDI)均明顯高于正常組(P<0.01)。各治療組用藥2周后能明顯改善模型大鼠的一般狀態(tài)，降低DAI、CMDI評(píng)分，病理形態(tài)學(xué)也得到明顯改善，與模型組比較，各組均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；芪仙安腸方中、大劑量組D

6、AI評(píng)分及CMDI評(píng)分與小劑量、SASP組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 MPO含量：模型組MPO含量明顯升高，與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01).芪仙安腸方各組和SASP組MPO含量明顯低于模型組(P<0.01或p<0.05).芪仙安腸方中、大劑量組MPO含量與SASP組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 MDA與SOD含量：模型組MDA含量明顯高于正常組(P.<0.01)，治療后芪仙

7、安腸方各組和SASP組MDA含量明顯低于模型組(p<0.01)，芪仙安腸方中、大劑量組MDA含量與SASP組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01).模型組SOD含量明顯低于正常組(p<0.01).芪仙安腸方各組和SASP組SOD含量明顯高于模型組(p<0.01)，芪仙安腸方大劑量組與SASP組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　 T細(xì)胞亞群、血清Ig的變化：模型組CD3+、CD4+百分比明顯升高，CD8+百分比降低，CD4

8、+，CD8+比值升高，IgA、IgG、IgM含量升高，與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01).芪仙安腸方各組和SASP組CD3+、CD4+百分比明顯下降，CD8+百分比升高，CD4+/CD8+比值降低，IgA、IgG下降，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05或p<0.01).芪仙安腸方中、大劑量組對(duì)CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值及IgA、IgG的影響，與SASP組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或p<0.

9、01)。
　　 IL-2、IL-4、TNF-α含量：模型組IL-2、TNF-α含量明顯升高，IL-4含量明顯降低，與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；芪仙安腸方各組和SASP組IL-2、TNF-α含量均有不同程度的降低，IL-4含量升高，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01).芪仙安腸方中、大劑量組IL-2、TNF-α、IL-4水平與SASP及小劑量組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.0

10、1)。
　　 ICAM-1表達(dá)：模型組ICAM-1的表達(dá)明顯高于正常組(P<0.01)，芪仙安腸方及SASP組能降低ICAM-1表達(dá)量，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01).芪仙安腸方小、中、大劑量組ICAM-1表達(dá)水平與SASP組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 NF-κB表達(dá)：正常組僅少量表達(dá)，模型組呈高表達(dá)狀態(tài)，明顯高于各治療組(P<0.01)，芪仙安腸方各組能降低NF-κB表達(dá)，與模型組比較差

11、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01).芪仙安腸方小、中、大劑量組NF-κBp65表達(dá)水平與SASP組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(扮0.05)。
　　 MIFmRNA的表達(dá)：模型組MIFmRNA的表達(dá)明顯增強(qiáng)，顯著高于正常組(P<0.01).芪仙安腸方各組能降低MIFmRNA的相對(duì)表達(dá)量，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01).芪仙安腸方大、中劑量組MIF基因相對(duì)表達(dá)量與SASP組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　

12、結(jié)論：根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，得出結(jié)論如下：
　　 1、采用TNBS/乙醇溶液灌腸法成功復(fù)制了UC大鼠模型，芪仙安腸方對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性UC有良好的治療作用，可減少DAI、CMDI評(píng)分，降低結(jié)腸組織MPO水平；中、大劑量組治療作用多優(yōu)于小劑量和SASP組。
　　 2、芪仙安腸方可降低UC大鼠結(jié)腸組織中MDA的含量，增加SOD的活力；能降低UC大鼠外周血CD3+、CD4+百分比，提高CD8+百分比，降低CD4+/CD8+比值；能降低血清I