反相高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)法在食品維生素A和維生素E（α-生育酚）測(cè)定中的應(yīng)用.pdf

1、維生素A(Retinol)和維生素E(Tocopherol)是機(jī)體維持正常代謝和機(jī)能必需的脂溶性維生素。由于這兩種維生素在外界環(huán)境中不穩(wěn)定，易受光、氧等影響而被氧化破壞，影響因素較多，因此尋找合適的測(cè)定方法同時(shí)測(cè)定維生素A和E仍然是目前檢驗(yàn)技術(shù)的難點(diǎn)。目前的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定方法測(cè)定時(shí)間長(zhǎng)、方法繁瑣，可能導(dǎo)致樣品中脂溶性維生素?fù)p失，回收率也不高。本文建立了一種快速、靈敏、準(zhǔn)確的反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定食品中維生素A(retinol)和α-生

2、育酚(α-tocopherol)的方法，樣品處理簡(jiǎn)單，方法簡(jiǎn)便易行，并用建立的方法對(duì)鞍山地區(qū)市售嬰幼兒食品及保健食品中維生素A和E進(jìn)行了測(cè)定，取得較好的結(jié)果。 材料與方法: 一、材料 (一)主要儀器和試劑美國(guó)安捷侖1100高效液相色譜儀，二極管陣列檢測(cè)器；色譜柱：Supelco C 18柱，15cm×2．1mm，5 μm(美國(guó)安捷侖公司)；超聲波清洗器；N-EVAP TM 112氮?dú)獯祾邇x；LXJ Ⅱ型離心沉淀機(jī)

3、，0～4000r/min；0/45 μm有機(jī)系針筒式微孔濾膜過(guò)濾器；超純水系統(tǒng)(中國(guó)北京)；維生素A和α-生育酚標(biāo)準(zhǔn)品，含量>99.0％(美國(guó)sigma公司產(chǎn))。 (二)樣品來(lái)源隨機(jī)抽取鞍山地區(qū)市售嬰幼兒食品及保健食品。 二、方法 取一定量食品樣品加入無(wú)水乙醇、氫氧化鉀及焦性沒(méi)食子酸，80℃水浴皂化30min，經(jīng)石油醚提取，氮?dú)獯祾邼饪s致干后用流動(dòng)相溶解，進(jìn)樣5 μl分析；色譜條件：色譜柱Supelco C 18

4、柱(15cm×2.1mm，5μm)，流動(dòng)相甲醇：水(93：7)，流速0.4ml/min，柱溫40℃，DAD掃描波長(zhǎng)范圍210～370nm，檢測(cè)波長(zhǎng)325nm(Vitamin A)和294nm(Vitamin E)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 一、維生素A與維生素E檢測(cè)相關(guān)性研究 維生素A在1.0～100.0mg/L濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)r=0.9998；維生素E在0.10～10.0mg/L濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)r=

5、0.9991。 二、維生素A與維生素E回收率實(shí)驗(yàn)本方法維生素A和維生素回收率>96％，效果良好。 三、維生素A與維生素E精密度檢測(cè)取1份樣品進(jìn)行精密度試驗(yàn)，重復(fù)測(cè)定5次，精密度較好。 四、反相高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)法與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定方法比較 稱取同一樣品(完達(dá)山乳粉)5份，分別用本法和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定方法GB/T5009．82-2003測(cè)定，檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著性差異。 五、反相高效液相色譜-二極管陣列

6、檢測(cè)法對(duì)鞍山地區(qū)樣品評(píng)估 在鞍山市場(chǎng)抽取嬰幼兒食品及保健食品30份，分別用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法和本方法進(jìn)行測(cè)定，按照相應(yīng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和產(chǎn)品標(biāo)識(shí)判定，Va和Ve的合格率為100％。 討論: 一、色譜條件的選擇 分別應(yīng)用甲醇、甲醇：水、甲醇：乙酸：水以及不同濃度范圍NH<,4>Ac水溶液與甲醇按不同比例混合等幾種流動(dòng)相，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，在甲醇：水(93：7)條件下，幾種脂溶性維生素之間，以及和樣品中干擾物能達(dá)到較好的基線分離

7、；在0.2ml/min～2.0ml/min范圍內(nèi)改變流動(dòng)相流速，在流速為0.2ml/min～0/8ml/min幾種維生素出峰時(shí)間合適，峰形較好，干擾少；對(duì)幾種維生素標(biāo)準(zhǔn)溶液用紫外光譜儀進(jìn)行掃描，發(fā)現(xiàn)維生素A在325nm、維生素E在294nm處有最大吸收峰，二極管陣列檢測(cè)器的紫外吸收光譜圖也證實(shí)了這個(gè)結(jié)果，為保證二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)范圍包含所需波長(zhǎng)，我們確定波長(zhǎng)掃描范圍在210～370nm之間；我們確定進(jìn)樣量為5 μ l，測(cè)定結(jié)果令人

8、滿意。 二、樣品前處理?xiàng)l件的選擇 通過(guò)比較幾種不同的皂化劑及不同濃度，最后我們選擇l：lKOH溶液20ml；溫度越高皂化效果越好，綜合考慮，我們采用80℃水浴，皂化30min以保證各種樣品能皂化完全。通過(guò)比較BHA、對(duì)苯二酚和焦性沒(méi)食子酸等幾種抗氧化劑，發(fā)現(xiàn)在皂化液中加入16g/L的焦性沒(méi)食子酸，可有效地保護(hù)脂溶性維生素不被破壞。 三、標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍與最低檢測(cè)量 將混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)樣5 μl進(jìn)行測(cè)定

9、。用峰面積比對(duì)濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，維生素A在1.0～100.0mg/L濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)r=0.9998；維生素E在0.10～10.0mg/L濃度范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)r=0.9991。以基線噪聲三倍峰面積對(duì)應(yīng)的維生素A和維生素E含量作為最低檢測(cè)限，測(cè)得維生素A最低檢測(cè)量為0.8ng；維生素E的最低檢測(cè)量為90.7ng。 四、回收率試驗(yàn)與精密度試驗(yàn) 取同一樣品4份，測(cè)定維生素A和維生素E回收率，在96％以上。取

10、1份樣品進(jìn)行精密度試驗(yàn)，重復(fù)測(cè)定5次，精密度較好。 五、反相高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)法與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定方法比較 對(duì)照實(shí)驗(yàn)顯示，反相高效液相色譜一二極管陣列檢測(cè)法與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定方法GB/T5009．82-2003檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著性差異，本方法測(cè)定時(shí)間為2.5小時(shí)，檢驗(yàn)成本119元，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定方法測(cè)定時(shí)間為4小時(shí)，檢驗(yàn)成本176元。由此可見(jiàn)，本方法省時(shí)，節(jié)約檢驗(yàn)成本。 六、反相高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)法對(duì)鞍山地