菊花提取物效應(yīng)成分在大鼠體內(nèi)的分布和排泄研究.pdf

1、菊花(Flos Chrysanthemi)是菊科菊屬植物菊(Xhrysanthemum morifoliumRamat)的頭狀花序，系亦食亦藥的常用中藥材，含綠原酸、黃酮、揮發(fā)油等成分。研究表明，木犀草素-7-O-β-D-糖苷和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷是菊花中主要的黃酮類(lèi)化合物，也是其發(fā)揮抗氧化及舒血管作用的活性成分。動(dòng)物口服菊花提取物(Chrysanthemum morifolium extract，簡(jiǎn)稱(chēng)CME)后上述黃酮苷類(lèi)

2、化合物在腸道微生物或小腸上皮細(xì)胞水解酶的作用下，會(huì)轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的苷元，主要為木犀草素(5，7,3,4’-四羥基黃酮)和芹菜素(5，7，4’-三羥基黃酮)而被吸收。本實(shí)驗(yàn)室研究表明，木犀草素和芹菜素是口服CME后體內(nèi)主要的效應(yīng)成分。 本研究室已經(jīng)對(duì)菊花提取物體內(nèi)主要效應(yīng)成分——木犀草素及芹菜素的藥代動(dòng)力學(xué)、肝微粒體代謝進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究。本研究主要揭示木犀草素和芹菜素在大鼠體內(nèi)的分布規(guī)律并比較在正常和心肌缺血病理狀態(tài)下的分布差異，并

3、通過(guò)考察木犀草素和芹菜素在大鼠尿液、糞便和膽汁中的排泄，以及對(duì)未知代謝物的分析，來(lái)初步了解CME在大鼠體內(nèi)的排泄途徑和形式，從而完善CME在動(dòng)物體內(nèi)過(guò)程的研究，并為CME的抗心肌缺血作用物質(zhì)基礎(chǔ)提供依據(jù)。 一、菊花提取物效應(yīng)成分在大鼠體內(nèi)的組織分布研究1．健康大鼠單次口服菊花提取物后組織分布研究目的：建立大鼠組織中木犀草素和芹菜素的HPLC分析方法，研究CME效應(yīng)成分在大鼠體內(nèi)的組織分布規(guī)律。 方法：健康SD大鼠(雄性)

4、隨機(jī)分為4組，單次灌胃CME200mg/kg，各組分別于給藥后0.17h、0.5h、4h、8h不同時(shí)間點(diǎn)處死，取出組織，制成勻漿，經(jīng)酸水解預(yù)處理后HPLc測(cè)定各個(gè)組織中木犀草素和芹菜素的藥物濃度。 結(jié)果：在心、肝、脾、肺、腎、腦、肌肉、體脂、睪丸和胃腸道等組織中，菊花提取物效應(yīng)成分木犀草素和芹菜素均有分布。在胃和小腸中濃度最高，其次是肝、腎、肺組織，在腦、睪丸的分布較低；木犀草素和芹菜素在大多數(shù)組織中于給藥后0.5h到達(dá)峰值，與

5、血藥濃度達(dá)峰時(shí)間相似。 結(jié)論：木犀草素和芹菜素在各器官的分布過(guò)程中，在給藥后較短時(shí)間內(nèi)即達(dá)最大濃度，分布速度快；且分布比較廣泛。 2．菊花提取物效應(yīng)成分在心肌缺血模型大鼠體內(nèi)的組織分布研究 目的：比較大鼠在穩(wěn)態(tài)正下常情況下和心肌缺血病理狀態(tài)下，木犀草素和芹菜素的分布情況，為菊花提取物抗心肌缺血物質(zhì)基礎(chǔ)的確定提供依據(jù)。 方法：SD大鼠(雄性)隨機(jī)分組為穩(wěn)態(tài)正常組、預(yù)防給藥組和治療給藥組，各組CME劑量均為2

6、00mg/kg。穩(wěn)態(tài)正常組連續(xù)7天灌胃CME；預(yù)防給藥組連續(xù)7天灌胃CME，于第6天給藥后行冠狀動(dòng)脈結(jié)扎；治療給藥組于第一天給藥前24h行冠狀動(dòng)脈結(jié)扎手術(shù)，后連續(xù)7天灌胃CME，各組大鼠于術(shù)次給藥后0.5小時(shí)，處死，取出主要組織，測(cè)定各個(gè)組織中木犀草素和芹菜素的藥物濃度，用t檢驗(yàn)進(jìn)行各組濃度比較。 結(jié)果：預(yù)防給藥組與穩(wěn)態(tài)正常組相比，木犀草素和芹菜素在大部分組織中的分布均較低。治療給藥組與穩(wěn)態(tài)正常組相比，木犀草素在大部分組織的濃度

7、相似：芹菜素在心臟中表現(xiàn)為濃度顯著增加。預(yù)防給藥組與治療給藥組相比，治療給藥組中木犀草素和芹菜素在大部分組織中的濃度均高于預(yù)防給藥組，血漿和心臟組織分布治療給藥組顯著高于預(yù)防給藥組，而預(yù)防給藥組中木犀草素和芹菜素在腦組織和睪丸組織中分布較治療給藥組高或相似。 結(jié)論：穩(wěn)態(tài)正常組與預(yù)防給藥組、穩(wěn)念正常組與治療給藥組之間，木犀草素與芹菜素的分布存在差異，且兩組給藥方式造成在血流量大的組織中分布存在明顯差異。 二、菊花提取物效應(yīng)

8、成分在大鼠體內(nèi)的排泄研究 目的:研究CME效應(yīng)成分在大鼠尿液、糞便和膽汁中的排泄，闡述其排泄規(guī)律、主要排泄途徑和形式。 方法：健康SD大鼠(雄性)單次灌胃CME 200mg/kg后，收集不同時(shí)間段的尿液、糞便和膽汁，尿液和膽汁樣品經(jīng)B-葡萄糖醛酸酶和硫酸酯酶水解處理，糞便樣品經(jīng)甲醇溶解超聲處理后，以HPLc法分別測(cè)定木犀草素和芹菜素在尿液、糞便和膽汁中的濃度，計(jì)算兩者各自的累積排泄率。 結(jié)果：在給藥后72h，木犀

9、草素和芹菜素總的尿藥排泄率分別為6.6％和16.6％：糞便中兩者的排泄率分別為31.3％和28.6％，其總的排泄率為37.9％和45.2％。與此同時(shí)，在膽汁中兩者也有一定的累積排泄量，分別占給藥劑量的2.05％和6.34％。 結(jié)論：木犀草素和芹菜素在尿和糞便中回收率均未達(dá)50％，推測(cè)兩者可能降解為簡(jiǎn)單化合物或轉(zhuǎn)化成其它代謝物形式排出體外；木犀草素和芹菜素結(jié)合物可能通過(guò)腸肝循環(huán)部分從小腸或結(jié)腸被分解和重吸收。 三、菊花提取

10、物在大鼠體內(nèi)代謝產(chǎn)物研究 目的：研究大鼠口服CME后尿液中發(fā)現(xiàn)的2個(gè)代謝產(chǎn)物(M1、M2)，找出其代謝途徑。 方法：尿樣酶解后，經(jīng)乙酸乙酯提取，與已知化合物的HPLC保留時(shí)間、Uv光譜比對(duì)，并經(jīng)HPLC-MS確證。 結(jié)果：M2與已知化合物香葉木素(4’-甲氧基-5，7,3’-三羥基黃酮)在HPLC圖譜上的保留時(shí)間一致、紫外吸收光譜相似。經(jīng)HPLC-MS分析，代謝物M1、M2分子量相同，碎片大小相同，在相同碰撞能量