RNA干擾TERT基因表達(dá)對大鼠脊髓損傷后瘢痕形成的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:利用星型膠質(zhì)細(xì)胞逆轉(zhuǎn)錄酶基因的慢病毒載體，轉(zhuǎn)染星型膠質(zhì)細(xì)胞及作用于大鼠脊髓損傷區(qū)，觀察其對星型膠質(zhì)細(xì)胞生長的影響及損傷區(qū)膠質(zhì)瘢痕的形成。
　　方法:體外培養(yǎng)大鼠脊髓源星型膠質(zhì)細(xì)胞，用逆轉(zhuǎn)錄酶基因的慢病毒載體轉(zhuǎn)染星型膠質(zhì)細(xì)胞;取60只SD大鼠，隨機(jī)分成4組:分別為實(shí)驗(yàn)組;陰性對照組;模型組;正常組。利用改良Allen's重物墜落法建立脊髓損傷動物模型，分別于造模成功后的3d、1w、2w、4w、6w，5個時間點(diǎn)取脊髓標(biāo)本，利用免

2、疫印跡(western-blot)法檢測GFAP、PCR-ELISA法檢測端粒酶的表達(dá)及免疫組化技術(shù)觀察膠質(zhì)瘢痕的形成。
　　結(jié)果:培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)鑒定為星型膠質(zhì)細(xì)胞，TERT基因慢病毒載體對星型膠質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率達(dá)85％-90％;且轉(zhuǎn)染后生長態(tài)勢出現(xiàn)明顯改變，在轉(zhuǎn)染后的24-48小時細(xì)胞凋亡達(dá)50％-60％。陰性對照組及空白組生長態(tài)勢無明顯改變。對脊髓損傷區(qū)瘢痕形成的影響，不同治療方式其BBB評分結(jié)果存在差異(P＜0.01)，且各對照

3、組與干擾組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。干擾組大鼠損傷脊髓GFAP表達(dá)低于其余各組，且逐漸減少，與陰性對照組及空白組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.001)，陰性及空白對照則增多，兩者間無差異(P＞0.05);端粒酶的表達(dá)在干擾組中降低，與其他各組比較均有統(tǒng)計(jì)差異(P＜0.001)。標(biāo)記NF-200熒光的，TERT基因慢病毒載體干擾組及正常組其熒光表達(dá)明顯高于陰性對照組及空白組。
　　結(jié)論:星型膠質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)可獲成功，靶向TER