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1、目的:探討基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(SDF-1)受體-CXCR4基因轉(zhuǎn)染豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)提高細(xì)胞體外遷移能力的可行性。
方法:(1)按照Nancer方法培養(yǎng)MSCs,轉(zhuǎn)染帶熒光的CXCR4基因,流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染前與轉(zhuǎn)染后MSCs的細(xì)胞周期。(2)用5-氮胞苷(5=aza)誘導(dǎo)轉(zhuǎn)染CXCR4基因的MSCs,并行結(jié)蛋白(desmin)、肌球蛋白重鏈(MHC)、心肌特異性肌鈣蛋白Ⅰ免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定。對(duì)照組為未轉(zhuǎn)染CX
2、CR4基因的MSCs。(3)通過Transwell趨化實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)經(jīng)過CXCR4轉(zhuǎn)染后的MSCs向SDF-1趨化能力的變化。
結(jié)果:(1)體外培養(yǎng)的原代MSCs10-14天達(dá)到融合,CXCR4基因轉(zhuǎn)染后的MSCs能成功表達(dá)CXCR4,轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞周期無明顯改變。(2)與對(duì)照組相同,實(shí)驗(yàn)組經(jīng)5-aza刺激后,部分MSCs成梭形,結(jié)蛋白、肌球蛋白重鏈、心肌特異性肌鈣蛋白Ⅰ免疫細(xì)胞化學(xué)染色均為陽(yáng)性。(3)Transwell趨化實(shí)驗(yàn)
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